胶乳凝集试验.PPT

血清中： IgG、 IgA、 IgM—— g/L IgD、 IgE—— mg/L 体液中： IgG、 IgA、 IgM——mg/L Ig的含量 Ig种类 血清含量（g/L） IgG 7—16 IgA 0.7—4.0 IgM 0.4—2.3 IgD 0.003-0.030 IgE 低Ig血症： 先天性：原发性免疫缺陷病（PID） 获得性：免疫抑制剂；淋巴系统恶性肿瘤；肾病 综合征；剥脱性皮炎 高Ig血症： 多克隆Ig增高：各种感染；自身免疫性疾病； 肝病 单克隆Ig增高：多发性骨髓瘤；巨球蛋白血症； 重链病；轻链病 临床意义 IgG：抗菌、抗病毒、抗毒素，自身抗体 IgA：粘膜局部免疫，抗菌、抗毒素 IgM：参与早期感染防御，溶菌，溶血， 类风湿因子 IgD：膜结合型（mIgD构成BCR），是B细 胞分化发育成熟的标志 IgE：变态反应性疾病，寄生虫感染 Ig的生物学活性 IgG分为4个亚型：IgG1，IgG2，IgG3， IgG4 IgG1：很强的激活补体，结合吞噬细胞的能力 IgG2：对多糖抗原的免疫应答中占优势 IgG3：对蛋白质和多肽类抗原的免疫应答中占优势 IgG4：最不活跃，主要参与过敏反应 每个亚型有各自的特性和功能，亚型检测与疾病的相关性（新生儿溶血、膜性肾病、原发性小血管炎等） 实验报告的要求 内容完整：实验题目、实验原理、试剂及器材、实验步骤、实验结果（注明样本编号和原始数据）、思考讨论等。 实验报告由班长收齐后于下次上课时交。 实验2: 免疫沉淀技术 华西医院实验医学科临床免疫实验室 安云飞 2018.03.14 背景 抗原-抗体反应 沉淀反应 凝集反应 直接凝集反应 间接凝集反应 间接血凝试验 胶乳凝集试验 明胶凝集试验 液体内沉淀试验 凝胶内沉淀试验 单向扩散试验 双向扩散试验 絮状沉淀试验 免疫浊度测定 免疫扩散技术——IgG测定 抗原——可溶性抗原 抗体——相应抗体 介质——凝胶 现象——肉眼可见的沉淀环 作用——定量 methods from clinical chemistry\standard cruve.JPG 单向免疫扩散试验（single immunodiffusion test） 实验原理 单向免疫扩散试验 将一定量抗体混匀于琼脂糖凝胶内。制板，打孔，在凝胶孔中加入标准抗原溶液或待测样本。 可溶性抗原在凝胶中向四周呈辐射状扩散并与凝胶中的抗体发生特异性结合，在抗原抗体比例合适处形成白色沉淀环。 沉淀环的大小与抗原的浓度成正相关。以不同浓度标准抗原液制做标准曲线，通过待测标本沉淀环大小（直径）可在标准曲线上查出其抗原浓度。 试剂与器材 羊抗人IgG抗体（单扩效价1:10） 待测血清 琼脂糖 生理盐水 温度计、玻璃板、打孔器、加样器、刻度尺等 操作流程 1 琼脂凝胶准备 用生理盐水配制浓度为1.2%（12g/L）的琼脂糖凝胶，置于水浴中煮沸溶化至澄清。 （已完成） 2 倒 板 将U型片置于两块玻璃板之间并以铁夹固定，直立于水平台面待用。 取9mL已溶化的琼脂糖凝胶于试管中 待琼脂糖温度降至56℃时，加入羊抗人IgG诊断血清1mL，在两支试管间颠倒混匀后迅速倒入事先固定好的玻璃板的间隙中。 待凝胶板完全冷却后，先取下铁夹再小心取下上面的玻璃板和U型片。（已完成） 3 打 孔 使用打孔器在凝胶板上打孔： 孔径：约3.5mm 孔距：10-12mm 7孔（2排）第一排：S1，S2，S3， 第二排：S4, S5，样本（重复2孔） S2 S1 S3 S5 S4 1 2 10-12mm 3.5mm 4 加 样 系列标准品稀释：用生理盐水将IgG标准品（S1）按1:2、1:4、1:8、1:16稀释成为系列标准品S2-S5。 待测样本用生理盐水1:2稀释。 每孔10μL，将标准品（S1-S5）或稀释后样本加入孔中。 注意：做好标记 5 扩 散 将加样完毕的凝胶板放入湿盒。 37 ℃，扩散24小时。 6 结果判读 准确测量S1-S5沉淀环的直径（单位：mm） 以沉淀环直径与相应标准品浓度的对数值绘制标准曲线。 准确测量待测样品的沉淀环的直径，在标准曲线上查出待测样本中IgG的浓度。 标准曲线（standard curve）： 指通过测定一系列已知组分的标准物质的某理化性质，而得到的性质的数值曲线。是标准物质的物理/化学属性跟仪器响应之间的数学关系。 横坐标(X)表示可以精确测量的变量（如标