医学ppt课件微生物药物的生物合成微生物新药的发现.ppt

2、蒽环类抗生素产生菌 的组合生物合成 蒽环类抗生素是一类临床上非常重要的抗肿瘤抗生素，它们同样是PKS生物合成途径，因此，通过以下集中组合生物合成的方法，可以得到一系列“非天然的天然杂合化合物”。 1）通过破坏靶基因的组合生物合成 通过基因框内的诱变或缺失，或插入抗生素耐药基因盒的方法，可以将所选择的靶基因特异性地钝化； 尽管靶基因的破坏可以得到新的化合物，但会出现错误的结果，这是因为一方面由于极性效应影响下游基因的表达，另一方面受到由于外源DNA片断的插入造成的反义RNA合成影响上游基因。 1）通过破坏靶基因的组合生物合成 在光神霉素（mithramycin）产生菌S.argillaceus中，破坏编码葡萄糖－1－磷酸－胸苷－5’－三磷酸胸苷转移酶的基因mtmD后，获得了两个四环类的光神霉素衍生物：premithramycinone和4－脱甲基premithramycinone衍生物； Premithramycinone的抗肿瘤生物活性与光神霉素相似，且有趣的是其化学结构与来源于黑曲霉A.niger的神经肽受体抑制剂BMS非常相似，如图所示。 通过基因破坏后得到的两个光神霉素衍生物和BMS-192548 2）通过表达杂合基因方法的组合生物合成 来源于S.fradiae的urdE基因，编码一种氧化酶，其可能涉及到将1分子氧引入到乌达霉素结构中； 在控制启动子ermE的条件下，将其在丁省霉素C产生菌S.glaucescens中表达，产生一种新的杂合化合物，6－羟基丁省霉素C，如图所示。 通过将乌达霉素产生菌的urdE基因在丁省霉素C产生菌 中表达，得到一种杂合产物6－羟基丁省霉素C 2）通过表达杂合基因方法 的组合生物合成 另外一个实例是，将柔红霉素产生菌S.peucetius中编码11-aklavinone-羟化酶的基因（dnrF），在阿克拉霉素产生菌S.galilaeus中表达，结果得到了一种新的杂合化合物，11－羟基阿克拉霉素A，如图所示。 这种羟基化的产物，其对白血病细胞和黑色素瘤细胞的生物活性比阿克拉霉素要强。 杂合化合物11－羟基阿克拉霉素A的组合生物合成 2）通过表达杂合基因方法 的组合生物合成 通过这种组合生物合成的方法，已经获得了数个杂合糖苷化的丁省霉素，如用含有一个完整埃罗霉素（elloramycin）基因簇（具有产生8－去甲基丁省霉素C的能力）的黏粒转化乌达霉素产生菌或光神霉素产生菌，可以得到四种新的糖苷化合物：齐墩果糖基、鼠李糖基、mycarosyl丁省霉素C和双齐墩果糖基丁省霉素C，如图所示。 有趣的是，这些脱氧糖在乌达霉素和光神霉素苷元上的附着位置，与在埃罗霉素的附着位置不同。表明，这些聚酮体的糖基转移酶具有底物宽泛性。 杂合糖苷化丁省霉素的组合生物合成 能够被ElmGT糖基转移酶转移的一些 糖基和elloramycin甙元的结构 四、原生质体融合与微生物新药的发现 微生物原生质体融合，即是指将双新株的微生物细胞分别通过酶解脱壁，使之形成原生质体，然后在高渗溶液的条件下混合，并加入物理的（如电融合）或化学的(如聚乙二醇)或生物的（如仙台病毒）助融条件，使双亲株的原生质发生相互凝集，通过细胞质融合，核融合，尔后发生基因组间的交换，重组，进而可以在适宜的条件下再生出微生物细胞壁，获得重组子的过程。 四、原生质体融合与微生物新药的发现 利用微生物厚生质融合寻找新抗生素的基本原理是来源于两种已知产生不同抗生素的产生菌的融合子，有可能将它们的部分生物合成基因整合在一起而产生新的杂合抗生素；另一个原理是由于抗生素产生菌中存在着沈默基因，当这些沉默基因受到外源物质刺激后，有可能被激活而产生，结构与亲株完全不同的新的抗生素。 四、原生质体融合与微生物新药的发现 应用这种方法获得的第一个新抗生素是吲哚佐霉素（indloizomycin）： 其亲株为链霉素产生菌灰色霉菌和天神霉素（istamycin）产生菌天神链霉菌S.tenjimariensis。 （目前的报道较少） 第二节生物合成途径的基因定向改变与微生物新药的发现 组合生物合成Combinatorial biosynthesis 是一种通过对天然产物生物合成途径中的基因进行中断、置换及重组等操作，改变原来抗生素产生菌或其他天然产物产生菌生物合成代谢产物的途径，产生具有新颖结构的“非天然的天然杂合产物（unnatural natural hybrid compounds）”的技术或方法。 组合生物合成的潜能 potential 重组、组合、互补