菩人丹超微粉对糖尿病大鼠视网膜ang 2 tnf α表达的影响-effect of pu ren dan ultrafine powder on expression of ang 2 tnf α in retina of diabetic rats.docxVIP

目录中文摘要??????????????????????????01英文摘要??????????????????????????03英文缩写??????????????????????????06研究论文菩人丹超微粉对糖尿病大鼠视网膜Ang-2、TNF-α表达的影响前言?????????????????????????07材料与方法??????????????????????08结果?????????????????????????19附图?????????????????????????23附表?????????????????????????31讨论?????????????????????????32结论?????????????????????????37参考文献???????????????????????38综述??????????????????????????43致谢??????????????????????????51个人简历??????????????????????????52菩人丹超微粉对糖尿病大鼠视网膜Ang-2、TNF-α表达的影响摘要目的：通过观察菩人丹超微粉（Purendansuperfinepowder，PRD）对糖尿病大鼠视网膜血管生成素2（Angiopoietin-2，Ang-2）和肿瘤坏死因子α（Tumornecrosisfactor-α，TNF-α）表达的影响，探讨PRD对糖尿病大鼠视网膜微血管病变的保护作用。方法：36只Wistar大鼠按随机原则分为3组：正常对照组、糖尿病模型组和PRD治疗组，每组12只大鼠。糖尿病模型组和PRD治疗组大鼠均采用2%STZ（25mg/kg·d）连续腹腔注射3天，建立2型糖尿病大鼠模型。以大鼠血糖≥16.7mmol/L作为成模判定标准。模型成功建立后，PRD治疗组大鼠按PRD1.8g/kg·d标准灌胃给药，糖尿病模型组大鼠按同样标准给于不含PRD的溶剂灌胃，连续灌胃12周。正常对照组大鼠常规饲养不做处理。采用ONETOUCH血糖仪检测各组大鼠的血糖水平；采用苏木精-伊红染色法（hematoxylin-eosinstaining，HE）观察大鼠视网膜形态学变化；采用SP免疫组织化学染色法和Westernblot法检测大鼠视网膜Ang-2蛋白的表达；采用Westernblot法和逆转录聚合酶链反应（reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR）法检测大鼠视网膜TNF-α蛋白和mRNA的表达。结果：1.各组大鼠的血糖水平：糖尿病模型组大鼠血糖为21.63±1.01mmol/L，与正常对照组大鼠的血糖4.57±0.42mmol/L相比显著升高（P＜0.01）；PRD治疗组大鼠血糖为14.60±0.95mmol/L，明显低于糖尿病模型组大鼠的血糖（P＜0.01）。2.各组大鼠视网膜组织病理学改变：正常对照组大鼠视网膜层次清晰，结构完整，内界膜表面平滑，各级神经细胞排列整齐有序，大小均匀。糖尿病模型组大鼠视网膜可见内界膜表面粗糙不平，明显肿胀增厚、部分内界膜破裂，偶见突出于内界膜的毛细血管内皮细胞，视网膜层次清晰欠佳，神经节细胞排列紊乱，细胞数量减少，可见细胞空泡样变、核固缩等现象。PRD治疗组视网膜内界膜表面粗糙欠平，轻度肿胀增厚、视网膜分层较清晰，神经节细胞排列轻度紊乱，细胞数量轻度减少。3.各组大鼠视网膜Ang-2的表达3.1SP免疫组织化学染色结果：Ang-2蛋白免疫阳性产物呈棕黄色颗粒状，表达位于细胞浆。Ang-2表达阳性细胞主要分布在大鼠视网膜神经节细胞层及内核层。与正常对照组相比糖尿病模型组胞浆Ang-2免疫阳性产物呈深棕黄色；PRD治疗组Ang-2免疫阳性产物表达较糖尿病模型组明显减弱，胞浆呈棕黄色。3.2采用MiVnt图像分析系统对免疫组化阳性表达面积进行定量分析结果：与正常对照组相比糖尿病模型组阳性表达面积明显增加（P＜0.01）；PRD治疗组与糖尿病模型组相比，阳性表达面积减少（P＜0.01）。3.3Westernblot法检测Ang-2蛋白表达结果：与正常对照组比较，糖尿病模型组大鼠视网膜Ang-2蛋白表达明显升高（P＜0.01）；PRD治疗组大鼠视网膜Ang-2蛋白的表达与糖尿病模型组比较明显降低（P＜0.01）。4.各组大鼠视网膜TNF-α的表达4.1Westernblot法检测TNF-α蛋白表达结果：与正常对照组比较，糖尿病模型组大鼠视网膜TNF-α蛋白的表达明显升高（P＜0.01）；PRD治疗组大鼠视网膜TNF-α蛋白的表达与糖尿病模型组比较明显降低（P＜0.01）。4.2RT-PCR检测TNF-αmRNA表达结果：与正常对照组比较，糖尿病模型组大鼠视网膜TNF-αmRNA