塞来昔布激活aktp53信号通路 减少肝细胞凋亡改善非酒精性脂肪性肝炎-celecoxib activates akt p53 signaling pathway to reduce hepatocyte apoptosis and improve nonalcoholic steatohepatitis.docxVIP

学位论文原创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。作者签名：日期：年月日学位论文使用授权声明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密的论文，按照保密的有关规定和程序处理。作者签名：导师签名：日期：年月日日期：年月日学位论文知识产权声明本人郑重声明：我所提交答辩的学位论文，是本人在导师指导下完成的成果，该成果属于汕头大学医学院，受国家知识产权法保护。本人在毕业离校前会将有关的研究资料和结果全部上交导师，离校后使用与学位论文相关的数据资料参加学术会议、公开报告、发表论文和申请基金等，须征得导师及导师所在单位的同意。不得擅自对外披露本论文尚未公开的研究成果。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。注：保密的学位论文在解密后适用本声明。研究生签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日汕头大学医学院硕士学位论文中文摘要背景及目的：随着人们生活水平的提高，非酒精性脂肪性肝炎（nonalcoholicsteatohepatitis,NASH）的发病率迅速增加。目前关于NASH的发病机制仍未完全明确，如今被广为接受的发病机制为“二次打击”学说。“首次打击”为胰岛素抵抗导致的肝脂肪变性，“第二次打击”为氧化应激、炎症反应及肝细胞凋亡等。已有报道称肝细胞凋亡是NASH发展过程中“第二次打击”的主要组成部分，因此，抑制肝细胞凋亡可能对改善和治疗NASH有重要意义。塞来昔布是环氧化酶2（Cyclooxygenase2,COX-2）的特异性抑制剂，目前主要作为一种抗炎镇痛药广泛应用于临床。研究表明，塞来昔布可通过抑制炎症反应改善NASH。然而塞来昔布可否通过抑制肝细胞凋亡从而改善NASH尚无定论。因此，本实验将使用蛋氨酸胆碱缺乏（Methionineandcholinedeficient,MCD）饲料诱导NASH小鼠模型，观察塞来昔布对NASH小鼠模型中肝细胞凋亡的作用及其潜在的分子机制，为临床上有效治疗NASH提供新的理论基础和作用靶点。材料和方法：1.实验小鼠采用C57BL/6J小鼠和COX-2基因敲除鼠。将野生型实验小鼠分成4组：对照组小鼠喂养对照饲料；MCD组小鼠仅喂养MCD饲料；MCD+CEL组小鼠在喂养MCD饲料的基础上给予每天塞来昔布工作液进行腹腔注射。MCD+CEL+MTF组则在MCD+CEL组处理的基础上每天加用Akt特异性抑制剂米替福新进行腹腔注射。而COX-2基因敲除鼠则用仅MCD饲料喂养，定为MCD（KO）组。全部小鼠处理3周后行心脏采血后处死，取肝脏组织做冰冻切片、固定包埋及-80°C保存备用。2.采用油红O染色和HE染色观察各组小鼠肝组织的脂质堆积情况并作比较。3.采用TUNEL-FITC试剂盒检测各组小鼠模型中肝细胞凋亡，并计算凋亡指数。4.采用甘油三脂（triglyceride,TG）试剂盒检测各组小鼠的肝TG含量，采用谷丙转氨酶（Alaninetransaminase,ALT）试剂盒检测各组小鼠血清ALT水平。5.采用前列腺素2（Prostaglandin2,PGE2）ELISA试剂盒检测小鼠肝脏中PGE2的水平变I汕头大学医学院硕士学位论文化情况。6.WesternBlot检测各组小鼠肝组织中Akt的磷酸化水平和p53的表达水平。7.实验数据分析和处理：用GraphPadPrism5.0软件，所有数据均使用单因素方差分析的Newman-Keuls检验进行统计学分析。结果：1.塞来昔布抑制NASH小鼠模型的肝细胞凋亡，改善肝脂质堆积、降低血清ALT水平。2.塞来昔布激活NASH小鼠肝脏组织中的Akt/p53信号途径。3.米替福新减弱塞来昔布的抗凋亡效应，加重肝脂质堆积、升高血清ALT水平。4.米替福新抑制塞来昔布对Akt/p53信号通路的活化作用。5.COX-2基因缺失改善NASH的肝细胞凋亡及脂质堆积。6.塞来昔布抑制COX-2的表达，激活Akt/p53信号途径。结论：塞来昔布通过抑制COX-2的表达，激活Akt/p53信号通路，减少肝细胞凋亡，改善NASH。关键词：塞来昔布；非酒精性脂肪性肝炎；凋亡；Akt；p53；COX-2II汕头大学医学院硕士学位论文AbstractBackgroundandObjectives：Withtheimprovementofpeople