三氯乙烯致敏小鼠免疫性肝损伤过程中补体活化产物对th1th2细胞平衡调控研究-study on the regulation of complement activation products on th1th2 cell balance during immune liver injury in trichloroethylene-sensitized mice.docxVIP

目录英文缩略词………………………………………………………1中文摘要………………………………………………………2英文摘要………………………………………………………6前言………………………………………………………10材料与方法………………………………………………………13结果………………………………………………………20讨论………………………………………………………45结论………………………………………………………48参考文献………………………………………………………49个人简介………………………………………………………54致谢………………………………………………………56综述………………………………………………………57英文缩略词英文缩写英文全称中文全称ALTAlanineaminotransferase丙氨酸转氨酶ASTAspartatetransaminase天门冬氨酸转氨酶CComplement补体C3Complement3补体3C3aComplement3a补体3aC3aRComplement3arecepter补体3a受体C3aRAComplement3areceptorantagonist补体3a受体拮抗剂C5b-9Membraneattackcomplex膜攻击复合物ELISAEnzymelinkedimmunosorbentassay酶联免疫吸附测定FCAFreund’scompleteadjuvant福氏完全佐剂FigFigure图GLBGlobulin球蛋白GPMTGuineapigmaximizationtest豚鼠最大值实验HRPHorseradishperoxidase辣根过氧化物酶hHour小时minMinute分钟wWeek周SPFSpecificpathogenfree无特定病原体TabTabel表TCETrichloroethylene三氯乙烯三氯乙烯致敏小鼠免疫性肝损伤过程中补体活化产物对Th1/Th2细胞平衡调控研究摘要研究背景三氯乙烯（Trichloroethylene，TCE）作为高分子化合物的常用原料被广泛应用于玩具、五金、电子等行业，主要用于线路板清洗、金属器械表面去污、油脂和石蜡萃取等。职业接触工人长时间低浓度接触TCE可导致职业性三氯乙烯药疹样皮炎（OccupationalDermatitisMedicamentosa-likeofTrichloroethylene,ODMLT），临床资料显示严重的肝损伤是ODMLT患者的主要致死原因之一，但是这种伴随的免疫性肝损伤用以往的迟发型变态反应并不能完全解释。现有报道发现，补体激活及其激活产物在ODMLT患者肝损伤过程中发挥重要作用，本课题组前期研究发现，在TCE致敏豚鼠和BALB/c小鼠中，存在大量的C3a、C5a和C5b-9的沉积，证实了补体激活及其激活产物在TCE致敏动物过程中确实发挥了重要作用，本研究拟在课题组前期研究的基础上，进一步探讨补体激活产物在TCE致敏动物过程中的具体机制。研究目的本研究通过建立TCE致敏BALB/c小鼠模型，采用腹腔注射C3aR受体阻断剂，特异性阻断C3a和C3aR的结合，研究TCE致免疫性肝损伤小鼠模型中C3a及其受体对Th1/Th2细胞平衡的影响。研究方法选取6～8wSPF级健康雌性BALB/c小鼠，经适应性喂养1w后，随机分成空白对照组、溶剂对照组、TCE处理组和C3aRA预处理组，根据豚鼠最大值试验和本课题组已发表的文章，建立TCE致敏BALB/c小鼠实验模型，根据皮肤致敏情况将TCE处理组分为TCE致敏组和TCE未致敏组，C3aRA预处理组分为C3aRA预处理TCE致敏组（阻断致敏组）和C3aRA预处理TCE未致敏组（阻断未致敏组）；采用HE染色观察不同组别小鼠肝脏病理改变，生化检测ALT和AST反映小鼠肝脏功能变化，采用免疫荧光双标的方法检测C3aRA在本致敏模型中的作用，采用免疫组化的方法检测各组中C3a和C3aR的表达情况，采用直接免疫荧光法检测补体激活末端产物C5b-9的表达，分别采用流式细胞术和酶联免疫吸附试验测定小鼠脾脏和血清中IFN-γ和IL-4的表达水平，利用SPSS软件包，对实验数据进行综合分析。结果1.小鼠致敏率65只TCE处理组实验小鼠共有24只发生明显的水肿和红斑，致敏率为36.9%；C3aRA预处理组共有62只实验动物，其中32只发生明显皮肤反应，判为阻断致敏组，致敏率为51.6%，本实验小鼠总体致敏率为44.1%。2.肝脏病理学检查结果HE结果显示，TCE致敏组中出现大量的肝细胞变性、坏死和炎细胞浸润，且相应时点阻断致敏组的这种情况表现更为明显和严重；空白对照组、溶剂对照组、TCE未致敏组和阻断未致敏组肝细胞形态正常，未见明显改变。3.小鼠肝功能检测结果对小鼠肝功