乳腺癌相关抗原ror1h-2kd限制性ctl表位疫苗制备及其抗肿瘤作用实验研究-preparation of breast cancer-related antigen ror1h - 2kd restricted ctl epitope vaccine and experimental study on its anti-tumor effect.docxVIP

重庆医 重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照 英文缩写 英文全称 中文全称 APC antigen presenting cells 抗原提呈细胞 ALL acute lymphocytic leukemia 急性淋巴细胞白血病 CAR chimeric antigen receptor 嵌合抗原受体 CDC complement dependent cytoxicity 补体依赖的细胞毒作 用 CLL chronic lymphocytic leukemia 慢性淋巴细胞白血病 CTL cytotoxic T lymphocyte 细胞毒性 T 淋巴细胞 DAMP damage-associated molecular pattern 损伤相关分子模式 DC dendritic cell 树突状细胞 DMSO dimethyl surfoxide 二甲基亚砜 EMT epithelial-Mesenchymal Transition 上皮间质转化 FI Flores-cenee index 荧光指数 FITC Fluorescein isothiocyanate 异硫氰酸荧光素 HLA human leucocyte antigen 人类白细胞抗原 HPLC high performance liquid chromatography 高效液相色谱仪 Ig immunoglobulin 免疫球蛋白 IFN-γ Interferon-γ 干扰素-γ IL-12 Interleukin-12 白介素 12 MCL Mantlecelllymphoma 套细胞淋巴瘤 MFI mean florescence intensity 平均荧光强度 MHC major histocompatibility complex 主要组织相容性复合 体 MZL marginal zone lymphoma 边缘区淋巴瘤 1 NHL non-Hodgkin’s lymphoma 非霍奇金淋巴瘤 PBMC Peripheral blood mononuclear cell ROR1 Receptor-tyrosine-kinase-like orphan receptor 1 磷酸盐缓冲液 受体酪氨酸激酶样孤 儿受体 1 TCR T cell receptor T 细胞抗原受体 Tα1 Thymosin α1 胸腺肽 α1 TLR Toll like receptors Toll 样受体 TNF Tumor Necrosis Factor 肿瘤坏死因子 TAP transporter associated with antigen processing 抗原加工相关转运蛋 白 2 乳腺癌相关抗原 ROR1 H-2Kd 限制性 CTL 表位疫苗制 备及其抗肿瘤作用实验研究 摘要 目的：预测鉴定肿瘤抗原 ROR1 的 H-2Kd 限制性 CTL 表位，制备 胸腺肽 α1 修饰的表位多肽疫苗，观察多肽疫苗的抗肿瘤作用，为乳腺 癌的免疫治疗奠定基础。 方法：查询 NCBI 蛋白质库，获得小鼠肿瘤抗原 ROR1 的氨基酸序 列，利用表位预测软件 BIMAS 及 SYFPEITHI 对小鼠肿瘤抗原 ROR1 的 H-2Kd 限制性 CTL 表位进行预测；根据预测结果，合成和纯化候选 表位肽。流式细胞仪检测候选表位肽与 H-2Kd 分子的亲和力。选取亲 和力较高的候选多肽与胸腺肽 α1 偶联制备多肽疫苗 ROR1-Tα1。ELISA 法检测 ROR1-Tα1 体外刺激小鼠脾细胞产生释放的细胞因子 IL-12 以及 IFN-γ。为研究多肽疫苗对小鼠的免疫保护作用，先用 ROR1-Tα1 免疫 BALB/c 小鼠三次，每周一次。首次免疫后第 7 天，在小鼠右侧腋窝接 种 4T1 乳腺癌细胞。末次免疫后 3 周将小鼠处死，剥离肿瘤，观察肿 瘤大小。 结果：使用表位预测软件 BIMAS 及 SYFPEITHI 进行预测，选取 4 条表位候选肽 ROR1 716-724 （ DCPPRMYSL ）， ROR1 269-277 （ SNPMILMRL ）， ROR1 788-796 （ NYMFPSQGI ）， ROR1 591-599 3 （DFLHIAIQI）；合成上述 4 条表位多肽，高效液相色谱法分析显示多 肽纯度≥95％。肽结合实验表明，随着表位多肽浓度增加，其与 MHC-I 类分子的亲和力亦逐渐增强，当表位多肽浓度达到 30μmol/L 的时候， 4 条表位多肽的荧光系数均1.5，提示具有较高的亲和力。选取两个预 测软件分析结果重叠的候选表位肽 ROR1 591-599（DFLHIAIQI）与胸 腺肽 α1 进行