三种致病弧菌感染养殖大黄鱼的分子流行病学分析-molecular epidemiological analysis of three pathogenic vibrios infecting cultured pseudosciaena crocea.docxVIP

三种致病弧菌感染养殖大黄鱼的分子流行病学研究摘要目前已明确引起大黄鱼溃疡病的病原菌主要有溶藻弧菌、哈维弧菌和副溶血弧菌。这些病原菌只有在鱼体中繁殖积累到一定程度时，才开始影响鱼体正常生活，对组织造成损伤从而引起疾病。因此，如何依据疾病的流行病学进行早期病原生物检测，分析病原生物的感染状况及其削长趋势，实现病害的预测预警就显得至关重要。本课题以引起养殖大黄鱼溃疡病的三种致病弧菌为研究对象，开展分子流行病学调查与分析，为养殖大黄鱼疾病的预防与控制起到积极的预警作用。本研究以浙江省象山县黄避岙大黄鱼养殖海区为实验点，选定投喂鱼虾等鲜活饵料的大黄鱼网箱3组，分别为一龄鱼、二龄鱼、三龄鱼；投喂配合饲料的二龄大黄鱼网箱1组。于2012-2013年在定点网箱组各随机采集大黄鱼10尾，每尾实验鱼分别取肝、肾、脾、肌肉等组织提取总DNA，利用三种弧菌多重PCR技术进行感染情况的检测与分析。每次采集大黄鱼同时，还跟踪监测了养殖网箱内及海区航道中央水体的理化因子及生物因子。包括水温、盐度、透明度、溶解氧、pH、磷酸盐、硝氮、总氮、总磷、化学耗氧量、TOC、叶绿素a，弧菌总数、粪大肠菌群数等指标。结果显示三种致病弧菌对大黄鱼的感染存在一定的差异性。溶藻弧菌、哈维弧菌对大黄鱼的感染率整体高于副溶血弧菌；从组织上分析，三种弧菌较肝脏、肾脏更易感染肌肉、脾脏；三种弧菌对不同鱼龄的大黄鱼感染率各不相同。研究还表明，三种弧菌在各个采样时间点都有感染，其中7-9月为弧菌感染率高峰期，台风后的感染率较台风前都有一定提高；投喂不同饵料对三种弧菌感染大黄鱼的相关性并不强；弧菌平板分离培养结果与运用多重PCR技术在检测方面表现出相似的感染趋势，但前者的感染率较后者低。根据大黄鱼三种致病弧菌感染率与环境因子间的相关性分析可知：水温与哈维弧菌及副溶血弧菌感染率表现出极显著相关(P0.01)，与溶藻弧菌感染率显著相关(P0.05)；水体中弧菌总数与哈维弧菌的感染率呈极显著的正相关关系，与副溶血弧菌的感染率呈显著相关关系，而其他环境因子与三种弧菌感染率相关性并不强。I另外，根据以上2年对大黄鱼溃疡病发生与三种致病弧菌感染率关系的研究可知，在大黄鱼溃疡病大面积爆发前几天，弧菌的感染率都会显示出较高数值。因此可以通过三种致病弧菌对大黄鱼感染的调查与分析来推测病害发生的可能性，尤其当大黄鱼组织检测到较高的弧菌感染率时，应提醒各养殖户积极采取应对措施做好疾病的防控。本研究结果将为养殖大黄鱼溃疡病预测预警模型的构建及有效防控提供实验依据和理论基础。关键词：弧菌，大黄鱼，分子流行病学，多重PCRIIMolecularepidemilolgyresearchonthreepathogenicvibrioinfectionofculturedlargeyellowcroaker,LarimichthyscroceaAbstractThepathogenthatcausedcankeronlargeyellowcroakerwasmainlyVibrioalginolyticus,VibrioharveyandVibrioparahaemolyticus.Onlywhenthesepathogensbredandaccumulatedtoacertainextent,theybegantoaffectthenormallifeonfishandtodamagetheorganization,ultimatelyleadthefishtoillness.Therefore,toachievetheforecastwarningofdisease,itiscriticaltodetectthepathogenicorganismsinearlyphaseaccordingtotheepidemiologyofdisease,alsotoanalyzeinfectionstatusandthetrendofincreaseanddecrease.Inthisresearch,wetookthethreekindsofpathogenicvibrioastheresearchobject,carriedoutthemolecularepidemiologicalinvestigationtopreventandcontrolthediseasesofculturedlargeyellowcroakerandtoplayapositiveroleinearlywarningofdisease.Inthisstudy,weselectedthelargeyellowcroakerbreedingseaareaforlaboratory,whichwasinHuangbi’ao,XiangshanofZhej