发酵工业的无菌技术课件_1.pptVIP

湿热灭菌原理 灭菌条件 灭菌不利方面 蒸汽具有很强的穿透能力，而且在冷凝时会放出大量的冷凝热，很容易使蛋白质凝固而杀死各种微生物。 121℃，30min。 同时会破坏培养基中的营养成分，甚至产生不利于菌体生长的物质。 一、培养基湿热灭菌原理 2. 微生物热死定律： 对数残留定律 在一定温度下，微生物受热致死遵循分子反应速度理论，微生物受热死亡的速率-dN/dt与任何瞬间残留的活菌数N成正比，即 当Nt=0时， t=∞, 既无意义，也不可能。 一般采用Nt=0.001，即1000次灭菌中只有一次失败。 Nt——经t时间灭菌后的残留菌数，个 N0——开始灭菌时原有的活菌数，个 k——比死亡速率常数（灭菌速率常数），s-1 大肠杆菌在不同温度下的残留曲线 嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢在不同温度下的死亡曲线 非对数残留定律 3. 灭菌温度和时间的选择 培养物质受热破坏也可看作一级反应： 式中C：对热不稳定物质的浓度；k’：分解速度常数； k、k’的变化遵循阿累尼乌斯方程： 当T1 →T2 ㏑ (k2/k1)/㏑(k2’/k1’)=ΔE/ΔE’1 (∵ΔEΔE’，P68表4-4) ∴随着T上升，菌死亡速率增加倍数大于培养基成分分解速率增加倍数，故一般选择高温快速灭菌 。 都与相应的活化能及T有关 4. 影响培养基灭菌的其它因素 培养基成分 油脂、糖类及一定浓度的蛋白质、高浓度有机物等增加微生物的耐热性 低浓度（1%-2%）NaCl对微生物有保护作用，随着浓度增加，保护作用减弱，当浓度达8%-10%以上，则减弱微生物的耐热性 pH：pH6.0-8.0，微生物最耐热，pH6.0，H+易渗入微生物细胞内，改变细胞的生理反应促使其死亡。∴培养基pH愈低，灭菌所需时间愈短。 培养基的物理状态 泡沫：泡沫中的空气形成隔热层，对灭菌极为不利，可加入少量消泡剂 。 培养基中的微生物数量 二、分批灭菌（实罐灭菌） 将配制好的培养基放入发酵罐中，通入蒸汽，使培养基和所有设备一起灭菌。这一过程也称为实罐灭菌 240 160 120 80 时间（min) 0 50 100 150 温度 升温 冷却 保温 培养基间歇灭菌过程中的温度变化情况 过程包括： 升温、保温和冷却三阶段。 各阶段对灭菌的贡献： 20%、75%、5%。 1. 灭菌工艺过程 分空气过滤器灭菌， 夹套或蛇管排冷水，开启 达700C左右 并用空气吹干 排气管阀，空气管通蒸汽， 也可夹套内通蒸汽 取样管 1200C，1×105pa 保温阶段，凡液面以下各管道 放料管 保温 都应通蒸汽，液面上其余各管 道则应排蒸汽，不留死角， 维持压力、温度恒定 保温结束，依次关闭 各排汽、进汽阀门 夹套或蛇管中通冷水 培养基降温到所需温度 向罐内通无菌空气 通蒸汽 罐压空气压力 2. 灭菌时间的估算 升温、冷却两阶段也有一定的灭菌效果，考虑到灭菌的可靠性主要在保温阶段进行，故可以简单地利用式㏑(Nt/N0) = -kt来粗略估算灭菌所需时间 例1：有一发酵罐内装40m3培养基，在1210C温度下实罐灭菌，原污染程度为每1ml有2.5×105个耐热细菌芽孢，已知1210C时灭菌速度常数k=1.8min-1，求灭菌失败机率为0.001时所需时间。 解：N0 = 40×106×2.5×105 = 1013(个) Nt = 0.001(个) k = 1.8(min-1) ㏑(Nt/N0) = -kt t = 2.303/k×[lg(N0/Nt)] = 2.303/1.8×[lg(1016)] =20.