实验动物胚胎工程技术课件.pptVIP

第十二章 实验动物胚胎工程技术;第一节 概述; 胚胎工程（Embryonic engineering）又称胚胎技术,是指用工程学的原理对动物的胚胎进行某种技术操作或改造，使之获得人们所需要动物的一系列生物技术的总称。 一、胚胎操作基本技术 1.超数排卵和卵母细胞、精子、受精卵的采集 2.体外受精 3.胚胎性别控制 4.胚胎分割 5.胚胎培养 6.胚胎移植 7.胚胎冷冻保存 二、体细胞克隆技术 三、干细胞技术 四、外源基因导入技术 ;胚胎工程的应用;2.生物制药：通过转基因技术将具有药用价值的生物活性蛋白的基因整合到宿主的染色体上，使其在乳汁、血液、尿液等体液中表达。通过收集、纯化这些体液中的生物活性蛋白，用于预防和治疗某些人类的疾病。 ;3.医学：通过建立卵母细胞的采集、体外受精、显微受精以及胚胎移植技术，用于不孕症的治疗；通过对胚胎培养和检测，剔除具有遗传性疾病的胚胎，达到优生优育的目的。 4.生命科学研究：阐明哺乳动物早期胚胎发生、发育机制等基础理论。 5.拯救濒危野生动物：通过野生动物生殖细胞和组织的冷冻保存、体细胞克隆和胚胎移植技术，扩大野生动物的种群。;第二节 胚胎操作基本技术;胚胎操作的整个过程局限在胚胎的早期发育;一、精子、卵母细胞、受精卵的采集和超数排卵;2.卵母细胞和受精卵的采集 从体内成熟并排到输卵管中去，需通过处死动物或外科手术获取卵母细胞；如果在交配后，则可获取受精卵或早期胚胎。 取自屠宰淘汰的或刚死亡的雌性动物的卵巢，从卵巢中分离卵母细胞经培养而得。;3.超数排卵（Superovolation）技术： 通过注射激素刺激卵巢大量排卵。经超数排卵处理，动物卵巢大量的卵泡同时成熟并排出，排卵数可增加几倍至十几倍，一次可获得大量的卵细胞、受精卵或早期胚胎。 所用激素有促卵泡激素（FSH）、人绒毛膜促性腺激素(HCG)和孕马血清促性腺激素（PMSG）、孕酮和前列腺素（PG）等，以前三种常用。;检查阴栓：妊娠0.5天;二、体外受精;三、胚胎性别控制;性别控制技术 通过对X精子与Y精子分离以控制性别。 在胚胎移植前对胚胎的性别进行鉴定以控制性别。 通过控制饲料特性、受精环境如改变精液或阴道的PH值等来控制性别。 ;（一）分离X精子与Y精子以控制性别 分离X精子与Y精子的依据：X、Y精子在体积、密度、电荷、运动性和DNA含量、表面抗原等方面存在差异。将X和Y精子分离再通过人工授精可以有效地达到性别控制的目的。 目前将X和Y精子分离的方法有沉降法、电泳法、免疫法和流式细胞仪法等。流式细胞仪法是当前分离X、Y精子较准确的方法，具有重复性、科学性和有效性的特点。; 应用流式细胞仪分离X和Y精子的原理： X精子的DNA含量比Y精子的高。对于奶牛，X精子比Y精子DNA含量高3.8％，由于染料着色量与精子DNA含量成正比，因此X精子吸收的染料多，发出的荧光就比Y精子强。;具体的做法： 先用DNA特异性染料对精子进行活体染色，然后精子连同少量稀释液逐个通过激光束。探测器根据精子的发光强度把电信号传递给计算机，计算机指令液滴充电使发光强度高的液滴带正电，弱的带负电。即X精子带上正电荷，Y精子带上负电荷。当经过高压电场时会向不同方向偏转，达到分离的目的。;（二）对胚胎进行鉴定以控制性别 在胚胎移植前对胚胎的部分组织用染色体检查、间接免疫荧光法和PCR法进行性别鉴定。其中PCR法因有可靠的操作程序，具有高效、快速的特点，近年来得到迅速的发展。 Y染色体短臂上有决定雄性的DNA片段-SRY基因(sex-determining region of Y-chromosome,全称:Y染色体性别决定区)，为胚胎性别鉴定提供了可靠的途径。;2018/7/29;四、胚胎培养;胚胎培养一般应用于以下几个方面： 1.未成熟卵母细胞通过体外培养，成熟后进行体外受精。 2.受精卵通过体外培养发育成各阶段的早期胚胎，用于胚胎移植或胚胎冷冻保存。 3.冷冻保存胚胎解冻后，通过体外培养，筛选成活胚胎用于胚胎移植。 4.通过研究胚胎发育的环境和条件，不断完善胚胎培养条件，揭示胚胎细胞的生长发育和分化的奥秘。 目前胚胎培养技术已经可以将未成熟卵在体外成熟，并通过体外受精发育成各阶段的早期胚胎。即使如此，在体外胚胎培养也只能发育到囊胚期，需要在囊胚期前移植到动物的子宫内。;五、胚胎移植;体外培养的胚胎必须移植到同步发情的雌性动物生殖管道内。 1.利用自然同期发情的母畜，此法在实践上较难办到。 2.通过注射某些激素(如孕激素、雌激素等)诱发同期发情。 不同发育阶段的胚胎移植的部位不同。 受精卵和2细胞胚胎应移植到输卵管内，而桑椹胚和囊胚期胚胎应移植到子宫内，以跟正常妊娠生殖生理变化同步。;同一种