生物信息挖掘新基因预测平台的建立与tseg-3的克隆和功能初步研究-establishment of a new gene prediction platform for biological information mining and preliminary study on cloning and function of tseg - 3.docx

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2018-08-01 发布于上海
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生物信息挖掘新基因预测平台的建立与tseg-3的克隆和功能初步研究-establishment of a new gene prediction platform for biological information mining and preliminary study on cloning and function of tseg - 3

第四部分：过表达TSEG-3基因对小鼠精母细胞系GC-2spd增殖、凋亡的影响摘要目的：探讨TSEG-3过表达对小鼠精母细胞系GC-2spd(ts)的增殖和凋亡的影响。方法：通过构建pEGFP-TSEG-3载体和体外培养小鼠精母细胞系GC-2spd(ts)，观察融合蛋白EGFP-TSEG-3的亚细胞定位；采用MTT法检测TSEG-3过表达对GC-2spd(ts)细胞增殖的影响；应用流式细胞仪分析TSEG-3过表达对GC-2spd(ts)细胞周期的作用；AO/EB双重染色法、Hoechst33258/PI双染、AnnexinV/PI双染法和JC-1染色分析TSEG-3过表达对GC-2spd(ts)细胞凋亡率的影响；Real-TimeRT-PCR分析TSEG-3过表达对凋亡相关蛋白的影响。结果：融合蛋白EGFP-TSEG-3定位于细胞核，MTT法结果提示TSEG-3过表达抑制GC-2spd(ts)细胞增殖；TSEG-3过表达诱导GC-2spd(ts)细胞出现G1和G2/M期捕获。TSEG-3过表达诱导GC-2spd(ts)细胞凋亡，Real-TimeRT-PCR显示TSEG-3过表达诱导Fas上调，同时Bcl-2/Bax比率下调，说明Fas/Fas通路和Bcl-2/Bax均参与TSEG-3过表达诱导GC-2spd(ts)细胞凋亡。结论：TSEG-3过表达抑制GC-2spd(ts)细胞增殖,诱导GC-2spd(ts)细胞凋亡，Fas/Fas通路和Bcl-2/Bax均参与TSEG-3过表达诱导GC-2spd(ts)细胞凋亡途径。【关键词】TSEG-3；GC-2spd；细胞培养；细胞凋亡第五部分：TSEG-3过表达诱导小鼠睾丸精原细胞凋亡及其睾丸疾病模型表达谱分析摘要目的：整体水平探讨TSEG-3过表达对小鼠睾丸精原细胞的影响，并分析其在睾丸疾病模型表达谱。方法：制备invivo-jetPEI?-pEGFP-TSEG-3聚合物，构建TSEG-3过表达模型，HE染色和Tunel分析TSEG-3过表达对小鼠生殖细胞的影响；同时构建手术隐睾模型，分析TSEG-3转录水平与细胞凋亡率的关系，分析温度对TSEG-3转录水平的影响；复制17β雌二醇诱导隐睾模型，检测17β雌二醇诱导隐睾模型中TSEG-3转录水平，明确17β雌二醇对TSEG-3转录的影响。结果：荧光显微镜观察提示InVivoJetPEITM是一种高效、可靠安全的DNA转染试剂，能有效的携带外源DNA入生殖细胞。TSEG-3过表达使睾丸组织生精小管官腔内细胞密度减少，生精小管官腔变薄，大量精原细胞及精母细胞缺失，未发现成熟精子。Tunel结果提示TSEG-3过表达可能诱导生精细胞的凋亡。手术隐睾模型结果显示：TSEG-3的转录激活与手术组小鼠睾丸内生精细胞凋亡率增加呈正相关关系，进一步提示TSEG-3可能参与睾丸组织生精过程中细胞凋亡过程。17β-雌二醇诱导隐睾模型原位杂交结果提示17β-雌二醇可能参与抑制不同阶段生殖细胞中TSEG-3的转录。结论：TSEG-3过表达诱导小鼠睾丸生殖细胞凋亡，温度可能诱导TSEG-3的转录，17β-雌二醇可能参与抑制不同阶段生殖细胞中TSEG-3的转录。【关键词】TSEG-3；隐睾；17β-雌二醇；细胞凋亡PARTIEstablishingofnovelgenepredictionplatformbasedonbioinformaticsdataminingAbstractObjective:Accordingtothelatestdevelopmentofbioinformaticsdatabasesanddataminingtechniques,tofullyexploitthevaluableinformationoftheexistingbiologicaldatabaseandbuildthenewtechnologyplatformsofcloningandfunctionalpredictionbasedonbioinformaticsanddatamining.Method:SearchdbESTdatabaseanddownloadtargetsequenceinvolvedintheresearch.TheanalysisoftheselectedsequencewillbealignmentedusingtheprogramofBlastinmousegenomic.DownloadtheclustersofUnigeneandthesplicing,extensionandassemblyofESTclusterswerecarriedoutusingBiolignsoftware.TheassembledcontigsofES