抗体的标记课件.ppt

氯胺T(ch-T)法 使用无还原剂的高比放射性碘源 ch-T用量要低 控制总反应体积200μl 反应时间1分钟～2分钟 弱碱性反应条件 二、放射性核素标记结合物的纯化 标记反应后形成的结合物不能直接使用，需去除游离125I和其他杂质。 游离125I和125I标记抗体（抗原）分子大小相差悬殊，采用凝胶层析即可分离，如葡聚糖凝胶（Sephadex G-50）柱层析。 125I结合物纯化 凝胶过滤法 离子交换层析法 聚丙烯酰胺凝胶电泳 高效液相色谱法 去除游离125I 去除过度标记的标记物 三、放射性核素标记结合物的鉴定 放射性核素结合物的鉴定包括放射化学纯度、比放射活性和免疫活性三个参数： 放射化学纯度指在标记物中结合在抗原（或抗体）上的放射活性占该标记物总放射活性的百分比。 比放射活性是指单位质量标记物中所含的放射性强度，也可理解为每分子抗原（或抗体）平均所结合放射性原子数目，常用Ci/g或Ci/mmol表示。 免疫活性指标记物与抗原或抗体反应的能力。免疫活性测定方法，用少量标记物与过量抗体反应，测定与抗体结合部分（B）的放射活性，并计算与加入的标记物总放射活性（T）的百分比（B/T）。 125I结合物鉴定 标记物质量 高纯度 高比放射活性 完整免疫活性 放射化学纯度 单位标记物中结合于抗原或抗体上的放射活性占该标记物总放射性的百分比 应大于95% 免疫活性（im