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环境仪器分析 实验指导书 吴娟 主编 资源与环境学院环境科学教研室 实验一 可见光分光光度计系列、紫外可见分光光度计的使用及校正 （一）分光光度计的发展与使用方法 一、实验目的： 使学生能根据仪器说明书安装仪器，达到了解仪器的原理及构造，并熟悉仪 器的使用方法和仪器的调试方法。 二、实验原理： 分光光度法是基于物质分子对光的选择性吸收建立起来的分析方法，当一束 平行单色光照射到任何均匀、非散射的溶液时，光的一部分被溶液吸收，一部分 光透过溶液。不同物质的溶液对光的吸收程度与其浓度、透过的液层厚度及入射 光的波长等因素有关。当入射光波长一定时，其定量关系符合朗伯比尔定律： I A=lg o =KLC A 为吸光度 C 为溶液的浓度 L 为光程 I t 三、试剂和仪器设备 可见光光度计 紫外可见分光光度计（均注明仪器型号） 石英比色皿 玻 璃比色皿 0.004%高锰酸钾溶液 四、实验步骤 （1）熟悉仪器的操作规程及注意事项。 （2 ）按照仪器说明书连接好仪器。 （3 ）打开仪器上盖讲解仪器各部分组成。 （4 ）利用基准物质校准仪器的波长。 （5 ）用0.004%高锰酸钾溶液，以蒸馏水为参比，测定其最大吸收波长是否 在 523nm 和 544nm 。 五、思考题： 简述分光度计使用注意事项。 （二）分光光度法测定溴百里酚蓝的pK 值 a 一、实验目的 1.了解和掌握分光光度法测定指示剂pK 值的原理和实验技能。 a 2.学习掌握酸度计的使用方法，掌握用作图法求pK 值的方法。 a 二、实验原理 分析化学中常用的指示剂、显色剂大多为有机弱酸或弱碱，若其酸式和碱式 体具有不同颜色，便可利用光度法来测定其离解常数。 溴百里酚蓝为一元弱酸，在溶液中存在如下离解平衡： HIn H In + + - [ H ][ In ] + - K a [HIn] [HIn] 即 pK pH lg a + - [In ] - 由上式可知，在一确定的pH值下，只要知道[HIn]与[In ] 的比值，就可以计算 pKa值。根据吸光度加和性原理得： A [HIn] [In ] ε +ε -