水热处理大豆概述.docVIP

大豆蛋白的水热改性研究 ，， 摘要：本文，研究了不同水热预处理的温度和时间对大豆蛋白酶解敏感性的影响。：对胰酶酶解大豆蛋白的最佳条件为底物质量分数5%，水热温度，水热时间对复合酶酶解大豆蛋白的最佳条件为底物质量分数5%，水热温度，水热时间水解度。，水热预处理能够提高大豆蛋白酶解敏感性 关键词：大豆蛋白、水热处理、酶解、响应面分析 大豆蛋白由于营养价值高、成本低廉，一直是国内外研究的热点。然而大豆蛋白分子高度压缩、结构紧密，对蛋白酶的酶解作用具有很强的抵抗力。因此酶法改性大都存在水解效率低、酶解不彻底的问题，这严重制约了球蛋白酶法改性的实际效果必须对其进行预处理使蛋白变性。水热预处理是在密闭的压力容器中（如高压灭菌锅），以水或其它液体作为介质，在高压条件下对蛋白进行加热处理。大豆蛋白在水热预处理的过程中，同时受到高温、高压的作用，其高级结构和分子间的聚集状态改变，紧密的结构松散开，暴露出更多的酶解位点，从而提高酶解敏感性。若热过度会阻碍酶对大豆蛋白的水解作用。 本实验采用水热对大豆蛋白进行，为其进一步开发利用提供研究基础。 1 材料与方法 1.1 材料与设备 ：山东万德福植物蛋白科技有限公司；胰酶：重庆新祥盛生物制药；复合酶：公司；甲醛：广州化学试剂厂其他所有化学试剂均为分析级。。 1.2 方法 SPI→分散到水中配制成悬浮液→4℃冰箱中隔夜→水热处理→调节pH至最适→加入蛋白酶酶解→沸水浴中灭酶15min→冷却至室温→测量水解度→冷冻干燥→电泳实验→傅里叶变换红外光谱分析 1.2.解 本实验目的是水热法对酶解敏感性的影响由于预处理后暴露的酶切位点难以预测，因此选用酶切位点广泛的蛋白酶如胰酶和复合酶[24]，这样可以使预处理对酶切位点的暴露作用更明显，方便研究。前期实验， pH值 温度（℃） 酶解时间（min） 胰酶 7.5 55 120 复合酶 7.0 50 120 1.2.3 水解度的测定 采用甲醛电位滴定法[-6]。按式、计算DH 值： —————————————1） —————————————————-————（2） 式中：V样为滴定样品消耗标准NaOH溶液的体积/mL；V空为滴定空白消耗标准NaOH 溶液的体积/mL；CNaOH为滴定时NaOH溶液的浓度(mol/L)；M为1mL 1mol/L NaOH 相当于N 的质量，M ＝0.014；m为样品质量g。 1.2. 水热预处理 将大豆蛋白悬浮液置于高压灭菌锅中进行水热处理。选取影响较大的两个因素加热时间和加热温度作为考察因素，根据单因素实验结果确定不同蛋白酶水热预处理条件。结果表明，胰酶和复合酶水热处理所对应的水热温度均为122?126℃，水热时间均为12?24min。根据中心组合设计，通过Design-Expert 软件设计响应面优化模型，设水热温度(X1) 、时间( X2) 因素为自变量，DH为响应值，试验，见表。上述每个试验均进行2次，对应的响应值取2次实验结果的平均值。 Table 2 Factors and levels of response surface analysis 因素 水平 -1.414 -1 0 1 1.414 水热温度 122 122.59 124 125.41 126 水热时 12 13.76 18 22.24 24 1.2.5 蛋白质的测定 水解时加酶量改为0.05%，水解时间改为60min，水热预处理条件取最适。 蛋白的溶解性采用氮溶指数Nitrogen solubility index，NSI）表示将样品溶液常温下搅拌1h然后离心12,000 g，30min，20℃）取上清液 1.2.6 十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 SDS实验参考 Laemmli 的方法[]。将样品溶解于样品缓冲液（0.0625M Tris-HCl buffer (pH 6.8)，含有 2% (w/v) SDS，5% (v/v) 巯基乙醇，25% (v/v)甘油和 0.01% (w/v) 溴酚蓝）中配置成浓度为 10 mg/mL 的分散液。95℃下煮 5 min，离心后（12,000 ， min，20℃）取上清液。每个样品（浓度为0.6μg/ml）的上样量为10 μL。凝胶电泳在恒流下进行，在浓缩胶中电流为40 mA，进入分离胶后增至80 mA。凝胶染色及脱色后，与凝胶成像系统中进行成像处理。标准蛋白样品分子量范围 6500－200,000 kD实验采用傅立叶变换红外光谱仪 Nicolet 6700型，称取2?6 mg ，加入 0. g 左右的 KBr，一起研磨混制均匀，压片，平衡 。用红外光谱仪扫描，测定波段为 4000?400cm-1，扫描次数为次参照穆利霞[]的方法，用 PeakFit v4.12 软件对位于160