肺炎球菌结合疫苗质量控制李凤祥ppt课件.ppt

肺炎球菌结合疫苗质量控制;大纲;Serotype 19F; Photograph by Rob Smith ;肺炎球菌性疾病: 发病机理;疫苗可预防的死亡  2002年WHO报告;肺炎球菌侵袭性疾病（IPD）(按年龄分);肺炎球菌是引起儿童脑膜炎的主要致病菌之一;1982-1985年全国18省市肺炎球菌调查;1982-1985年全国18省市肺炎球菌调查;肺炎球菌耐药已迅速发展为国际性问题;我国肺炎球菌对抗生素耐药呈升高趋势;肺炎球菌多重耐药增加;大纲;肺炎球菌疫苗;肺炎球菌疫苗;肺炎球菌疫苗;大纲; 种子批系统 用于制备多糖的生产菌株应该符合国家法规的规定，建立原始种子批、主种子批和工作种子批库。 每一菌株均应具有产生特定荚膜多糖的能力。应保存历史记录，包括获得来源和进行的所有鉴别实验。 肺炎球菌的培养物有以下特性：在显微镜下应该能够观察到培养物复染有典型的肺炎球菌特征，菌株在37?C培养生长良好，而且应该有?溶血性光滑型菌落；胆汁溶解度试验发现应该被溶解;而且对奥普托欣很敏感；荚膜膨胀反应阳性。可使用核磁共振波谱法（1H或13C）来对提纯后的多糖进行鉴定。 ; 肺炎球菌生产用菌株 肺炎球菌荚膜多糖的生产是基于工作种子批（working seed lot）。工作种子批要和原始、主种子批具有相同的特征。 用于种子生产的培养基使用了来自动物的材料，则这些材料应该符合《与生物医药品有关的传染性海绵状脑病指导方针》中所给出的指导，而且应该得到国家管理机构的批准。应尽量避免采用动物来源的培养基。在菌种每一步扩增过程进行纯度检测及菌种鉴定。 ; 生产肺炎球菌多糖所使用的培养基: 疫苗生产所使用的液体培养基应该不含有会在提纯荚膜多糖时形成沉淀的成分。 应尽量避免采用动物来源的培养基。如果使用了来自动物的材料，则应该符合《与生物医药品有关的传染性海绵状脑病指导方针》中所给出的指导，而且应该得到国家管理机构的批准。 ; 单次收获液 应该通过生长率、pH值和最终生产的多糖来验证肺炎球菌生长的一致性。 ;肺炎球菌结合疫苗质量控制;肺炎球菌结合疫苗质量控制;肺炎球菌结合疫苗质量控制;蛋白杂质： 采用Lowry等人所建立的方法或??它经过验证的方法来测定蛋白含量。应该使用足够多的多糖来进行分析，以便能够准确地检测到1%的蛋白杂质。每批纯多糖的蛋白百分含量一般来说不应该超过3%。但是，蛋白含量可能会随着血清型的不同而不同，合格的蛋白杂质含量应该与国家管理机构的规定相符。;核酸杂质： 使用紫外分光光度测定法进行测定时，所测得的每批多糖所含有的核酸不应该超过2%（重量百分含量）。 致热原含量： 应该测定纯多糖的致热源含量，而且检测结果要在国家监督管理机构所规定的合格范围之内。可以对兔子进行公认的致热性试验，也可以通过鲎变形细胞溶解物试验来测定致热性。;肺炎球菌结合疫苗质量控制; 载体蛋白的质控 生产载体蛋白的微生物培养基应不含在人类致毒性或致过敏的物质。种子批系统有历史记录并定期验证菌株特性。如果种子制备、保存或生产时使用了任何来自动物的原材料，则这些材料应该符合《与生物医药品有关的传染性海绵状脑病指导方针》中所给出的指导（31），而且应该得到国家监督管理机构的批准。;载体蛋白的特性和纯度控制： 许多蛋白可以用作肺炎球菌结合疫苗的载体。载体蛋白最重要的特性一是具有安全性，二是与多糖结合后可以诱发针对多糖抗原的T细胞依赖性的免疫反应。 以常用的载体蛋白CRM197为例，在发酵和收获的过程中要进行纯度检测和菌种鉴定，来证实CRM197的抗原特性。进行ADP-核糖基化活性分析及其他分析方法（包括Hela细胞及Vera细胞分析和豚鼠致死性分析）来检测CRM197的残基毒性。 ;多糖与蛋白载体可通过多种方法进行结合。无论采用何种结合方法，都要建立质控程序来确保重复性、结合物的稳定性和安全性。应通过分析特定反应产物或其它方法来监测衍生和结合过程。结合过程采用的条件可能会导致不稳定基团的丢失，从而影响多糖链的结构。如果对单价原液的各种特性检测不能确认多糖链结构保持完整，应该进行多糖完整性的鉴定检测。 ;应该对单价批量结合物的特性进行鉴定。鉴定方法需经过验证. 结合物提纯工序应该可以清除结合反应和封端反应的残余试剂。应该通过适当的检测或通过对提纯过程的验证来确认已经将残余试剂和下述反应副产物清除：氰化物、1-乙烷基-3,3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺（EDAC）以及取决于化学结合反应的其它各种产物。;肺炎球菌结合疫苗质量控制;对于肺炎球菌结合疫苗来说，该比率一般在0