生物技术实践专题4 课件.ppt

专题4　生物技术在其他方面的应用;2015高考导航;一、植物的组织培养技术 1．植物组织培养的基本过程;MS培养基;(2)实验操作过程;3．月季的花药培养 (1)花粉发育过程：花粉母细胞(小孢子母细胞)→四分体时期→单核期→双核期→花粉粒。 (2)产生花粉植株的两种途径 (3)影响花药培养的因素：主要因素是材料的选择和培养基的组成。花药培养一般选择在________，选择的花粉处于发育过程中的________。;(4)实验操作的关键 ①材料的选取：挑选完全未开放的花蕾，确定花粉发育时期最常用方法是醋酸洋红法。 ②接种：灭菌后的花蕾，在无菌条件下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。 ③培养:温度控制在25 ℃左右,幼小植株形成后才需要_____。 二、DNA的粗提取与鉴定 1．原理：利用DNA与RNA、蛋白质等在____________性质 方面的差异，提取DNA，去除其他成分。;2．实验设计 (1)材料的选取：选用DNA含量相对较高的生物组织。 (2)细胞的破碎(以鸡血为例)： (3)杂质的去除方案 ①利用DNA在不同浓度的______溶液中溶解度的不同，通过控制其溶液的浓度去除杂质。 ②用木瓜蛋白酶去除蛋白质。 ③用高温(60～75 ℃)使蛋白质变性。;(4)DNA的析出：将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等 的、____________溶液可使DNA析出。 (5)DNA的鉴定：将析出的DNA溶于物质的量浓度为2 mol/L的NaCl溶液中，加入二苯胺试剂，沸水浴加热，溶液变蓝。;三、多聚酶链式反应扩增DNA片段 1．PCR原理 在80～100 ℃的温度范围内，DNA发生______，双螺旋结构解体，在温度缓慢降低后，DNA发生______，DNA单链与 ______通过碱基互补配对结合，耐高温的DNA聚合酶从引物的______开始延伸DNA链。 2．PCR的条件 缓冲溶液、DNA模板、2种______、4种脱氧核苷酸、耐热的DNA聚合酶，同时要控制温度。;四、血红蛋白的提取和分离实验 1．常用的分离方法：__________法、凝胶电泳法等。 2．基本原理 (1)凝胶色谱法的原理：相对分子质量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程____，流动____；相对分子质量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程____，流动____。 (2)凝胶电泳法的原理：不同蛋白质的带电性质、形状和 ________不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。;3．血红蛋白的提取和分离程序 (1)样品处理：红细胞的洗涤→__________的释放→分离血红蛋白溶液。 (2)粗分离——______：除去样品中相对分子质量较____的 杂质。 (3)纯化:一般采用__________法对血红蛋白进行分离和纯化。 (4)纯度鉴定：一般用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法来测定蛋白质的相对分子质量，即对血红蛋白进行纯度鉴定。;植物组织培养技术;3．影响植物组织培养的因素及成功的关键 (1)影响因素 ①内部因素：材料的选取。 ②外部因素：营养成分的种类及配比；植物激素的用量及使用顺序；pH、温度、光照等。 (2)获得成功的关键 ①植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗逆性差，对培养条件要求较高。 ②无菌技术主要包括对操作空间、实验用具、实验材料以及操作者的消毒或灭菌。 ③培养材料一旦被微生物污染，就会导致实验失败。原因是微生物增殖快，生长迅速，消耗养分多，并产生代谢废物毒害培养材料。一旦发现培养物被污染，特别是真菌性污染，应先将被污染的培养瓶统一放在高压蒸汽灭菌锅内进行高压蒸汽灭菌，然后再打开培养瓶进行清理。;4．菊花茎段组织培养技术和月季花药离体培养技术的比较;5.植物激素在组织培养过程中的重要作用 生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素，其作用及特点为： (1)在生长素存在的情况下,细胞分裂素的作用呈现加强的趋势。 (2)使用顺序不同，结果不同(具体如下表);[提醒]　(1)在剥离花药时，要尽量不损伤花药，否则接种后容易从受伤部位产生愈伤组织，同时还要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。 (2)花药开裂长出愈伤组织或释放出胚状体时，应及时转移到分化培养基上。;6．实验操作中易错的几个问题 (1)材料的选取：菊花的组织培养实验中，应选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝；月季花药的培养实验中，应选择花粉发育过程中的单核靠边期的花粉进行培养。 (2)外植体消毒：所用消毒剂为体积分数为70%的酒精和质量分数为0.1%的氯化汞溶液，所使用的清洗液是无菌水。 (3)培养过程：在初期，菊花的组织培养需光照；月季花药的培养前期不需光照，而在后期均需光照。 (4)月季花