阶段性实验学习总结.pptVIP

前言 近年来绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)作为报告基因广泛用于基因表达与调控、蛋白质定位、信号传递以及细胞分离与纯化等研究领域。但是它在分离与目的蛋白质相互作用的研究中却应用很少。 前言 蛋白质是生命活动的最基本单位，但在生物体内许多蛋白质并不是孤立地行使功能，而是往往与其它蛋白质形成复合体的形式才能发挥其功能，纯化蛋白质形成复合体是研究蛋白质功能最重要的环节，包括蛋白质－蛋白质相互作用、信号传导、蛋白质结构生物学研究以及药物先导化合物设计等 实验目的 探讨GFP在研究蛋白质与蛋白质相互 作用中的应用 研究影响GFP-抗体免疫亲和纯化方法的有效性和特异性的因素 解决蛋白质组学研究方法中的两个问题 绿色荧光蛋白（GFP）抗体磁珠是一种亲和介质，能小批量分离和纯化GFP融合蛋白。GFP抗体共价偶联到无孔顺磁颗粒上，抗体与磁珠的偶联在宽的pH值范围内较稳定且不会发生渗漏，因此可以用免疫磁性分离的方法从细胞培养上清液中或转染细胞中纯化与GFP融合蛋白形成的复合体蛋白。 一、GFP融合蛋白的构建 二、GFP抗原的获得 将表达载体转化进BL21，当A600=0.5时，加0.5mmoL/L IPTG诱导表达，30度培养4h. 裂解细胞，在所制备的含有可溶