五子衍宗丸对gnrh-a控制性超促排卵小鼠子宫s100a11蛋白影响的分析-effect of wuzi yanzong pill on s100a11 protein in uterus of gnrh - a controlled ovarian hyperstimulation mice.docxVIP

目录中文摘要11实验目的162资料与方法162.1实验动物162.2主要试剂及仪器162.3阴道涂片观察172.4免疫组织化学182.5小鼠子宫内膜S100A11mRNA表达的检测(Real-timePCR)182.6小鼠子宫内膜S100A11蛋白表达的检测（WesternBlot）212.7统计学处理233结果233.1小鼠阴道涂片233.2免疫组织化学24Real-timePCR结果24WesternBlot结果26实验二五子衍宗丸对GnRH-a控制性超促排卵小鼠着床期S100A11蛋白的调控271实验目的272资料与方法272.1实验动物272.2主要试剂及仪器2712.3造模与分组272.4小鼠阴道涂片观察282.5胚泡着床率的计算282.6免疫组织化学282.7小鼠子宫S100A11mRNA表达的检测(Real-timePCR)282.8小鼠子宫内膜S100A11蛋白表达的检测（WB）282.9统计学处理283结果283.1小鼠动情周期283.2小鼠阴栓率、妊娠率及着床期小鼠胚胎着床率情况283.3小鼠着床期子宫内膜S100A11mRNA及蛋白的表达29讨论321控制性超促排卵方案的选择322胚胎着床窗口期323观察指标S100A11的确立324实验研究时段的选择335中药五子衍宗丸的选择336五子衍宗丸对GnRH-a长方案COH后小鼠子宫内膜容受性及妊娠率的改善357问题与展望35参考文献37攻读学位期间发表论文情况412中文摘要控制性超促排卵（COH）长方案(GnRH-a+HMG+HCG)在防止卵泡过早黄素化和提升卵子质量方面优于其他方案，在临床辅助生殖技术中得到广泛应用。但其超过生理剂量的外源性激素降低了子宫内膜容受性，造成胚胎着床率降低，仅为正常的30%左右，这种高排卵率、低着床率和低妊娠率现象成为生殖医学亟待解决的难题。钙结合蛋白S100A11可调节肿瘤细胞增殖、侵袭及播散，因此推测S100A11可能对与肿瘤发生发展机制相似的胚胎种植有一定的调控作用，可能参与子宫内膜容受性和免疫耐受的形成。现代药理研究表明中药五子衍宗丸具有提高生殖器官重量、平衡性激素分泌,提高机体免疫功能等作用，临床用于治疗生殖泌尿、抗衰老等多种疾病。本研究第一部分通过观察S100A11蛋白在子宫的分布及S100A11mRNA和蛋白在小鼠胚胎种植早期子宫中的表达，探讨了钙结合蛋白S100A11在胚胎种植中的作用，为早期诊断胚胎种植障碍相关疾病和预测妊娠结局提供新的指标。本研究第二部分建立长周期超促排卵动物模型，观察中药五子衍宗丸对GnRH-a长方案控制性超促排卵（COH）小鼠妊娠率、胚胎着床率及着床期S100A11mRNA及蛋白表达的影响,探讨COH影响胚胎着床的机制，为临床辅助生殖过程中提高子宫内膜容受性、改善小鼠妊娠率和胚胎着床率提供理论依据。实验1钙结合蛋白S100A11在小鼠胚胎种植早期子宫中的表达目的：研究钙结合蛋白S100A11在小鼠胚胎种植早期子宫内膜中的表达及该蛋白在子宫内膜容受性中的作用。方法：取鼠龄8-10周雌性健康未孕SPF级昆明小鼠30只，按雌∶雄比例3∶1合笼,检查到阴道栓确定为妊娠第0日，分别于孕3天、4天、5天、6天剖取子宫,采用免疫组织化学法、Real-timePCR和WesternBlot法分别检测钙结合蛋白S100A11在妊娠早期子宫的细胞定位、mRNA和蛋白表达。结果：免疫组化结果显示S100A11蛋白主要分布于小鼠子宫内膜腺上皮和腔上皮；Real-timePCR结果表明S100A11mRNA在围着床期均有表达，其中妊娠第四天表达量最高；WesternBlot表明S100A11蛋白在围着床期子宫中均有表达，并在妊娠第四天、第五天明显升高。结论：钙结合蛋白S100A11调节了胚胎在子宫内膜上的粘附与侵入，参与了子宫内膜的容受性及免疫耐受。1关键词：S100A11;胚胎植入;子宫内膜容受性实验2五子衍宗丸对GnRH-a控制性超促排卵小鼠着床期S100A11蛋白的调控目的：观察GnRH-a长方案控制性超促排卵（COH）对小鼠阴栓率、妊娠率、着床期小鼠胚胎着床率及钙结合蛋白S100A11表达的影响，通过研究中药五子衍宗丸对COH小鼠着床期子宫S100A11表达的调控,探讨COH影响胚胎着床的机制，寻求有效改善COH低妊娠率的中药方剂。方法：模拟人类超排卵长方案，建立小鼠超促排卵模型。随机数字法将鼠龄8-10周雌性健康未孕SPF级昆明小鼠90只随机分成3组:模型组(GnRH-a+HMG+HCG),中药组(五子衍宗丸+GnRH-a+HMG+HCG),对照组（生理盐水），每组30只。造模结束后每组各取10只小鼠剖取子宫；余鼠按照雌∶雄比例3∶1合笼，检查到阴道栓确定为妊娠第0日，分别于孕4天、5天各取10只小鼠剖取