神经嵴细胞和isl-1阳性细胞与小鼠胚胎心流出道的发育-neural crest cells and isl - 1 positive cells and the development of mouse embryonic cardiac outflow tract.docx

山西医科大学硕士学位论文 山西医科大学硕士学位论文 I I 神经嵴细胞和 ISL-1 阳性细胞与小鼠胚胎心流出道的发育 中文摘要 研究背景：原始心管由三胚层胚盘的生心中胚层发育而来，仅是左心室的原基。流出道、 右心室等结构则是由位于原始心管头端和背侧的第二生心区间充质不断向心管动脉端添 加心肌细胞而形成。第二生心区心肌前体细胞标记蛋白转录因子ISL-1是调节第二生心区发 育的重要节点蛋白，调控第二生心区心肌前体细胞的增生及向心肌细胞的分化。ISL-1基因 敲除，胚胎心管流出道和右心室缺失，胚胎在发育9d～10d死亡。在多种信号系统和转录 因子的调节下，胚胎耳板与第三体节之间的神经嵴细胞沿3、4、6对鳃弓向心管流出道迁 移，与第二生心区心肌前体细胞相互作用，参与心管流出道的正常发育和分隔。去除神经 嵴，第二生心区向心管动脉端添加心肌细胞的功能降低，产生与第二生心区发育异常相似 或相同的流出道发育畸形。对正常小鼠胚胎不同发育时期第二生心区的时空分布、ISL-1 阳性细胞的分化潜能以及神经嵴细胞在迁移过程中与ISL-1阳性细胞的时空分布关系所知 甚少。本实验观察了迁移中的细胞视黄酸结合蛋白1（cellular retinoic acid binding protein 1, CRABP1）阳性神经嵴细胞和第二生心区ISL-1阳性心肌前体细胞在正常小鼠胚胎心流出道 发育过程中的时空分布特点，为进一步研究两类细胞在流出道发育过程中的相互作用及因 流出道发育异常而导致的先心病发生机制提供可靠的形态学实验依据。 研究目的：探讨迁移中的 CRABP1 阳性神经嵴细胞、ISL-1 阳性心肌前体细胞与小鼠胚胎 心流出道发育的关系。 研究方法：胚龄 7.5d～13d 小鼠胚胎心脏连续石蜡切片，选用抗 α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA） 抗体，抗心肌肌球蛋白重链（MHC）抗体，抗转录因子 ISL-1 抗体，抗 CRABP1 抗体和抗 磷酸化组蛋白 H3（PHH3）抗体，进行免疫组织化学或免疫荧光染色。 研究结果：胚龄 7.5d，部分中胚层细胞可见转录因子 ISL-1 和神经嵴细胞标记蛋白 CRABP1 微弱表达，而心肌分化特异性蛋白质 α-SMA 和 MHC 表达为阴性。胚龄 8.5d，ISL-1 阳性 心肌前体细胞出现在心背系膜，原始咽两侧和心包腔背侧壁间充质。胚龄 9d～10d，ISL-1 阳性细胞相继在头面部间充质及鳃弓核心间充质中形成。ISL-1 阳性间充质形成心管进一 步发育的第二生心区，向心管流出道远侧端添加心肌细胞。胚龄 11d～13d，ISL-1 阳性细 胞在咽前方聚集，形成特征性锥体形结构，并向升主动脉、肺动脉干及主肺动脉隔延伸。 胚龄 9d 前，神经嵴细胞散在分布于 ISL-1 阳性细胞之间，流出道远侧端可见少量 CRABP1 和 ISL-1 双阳性细胞。胚龄 10d，CRABP1 阳性神经嵴细胞分布在 ISL-1 阳性鳃弓核心间充 质周围。随发育，弓动脉等处的神经嵴细胞逐渐失去 CRABP1 表达，开始表达 α-SMA。 研究结论：第二生心区是动态结构，头面部中胚层、心包腔背侧脏壁中胚层、鳃弓核心间 II II 充质以及咽周围的间充质组织，在不同时空阶段内发育为 ISL-1 阳性第二生心区，向心管 动脉端添加心肌细胞。胚龄 11d～13d，ISL-1 阳性细胞开始向平滑肌方向分化，参与心包 腔内升主动脉、肺动脉干和主肺动脉隔的发育。在发育过程中，CRABP1 阳性神经嵴细胞 和 ISL-1 阳性细胞相互配合，在鳃弓形成独特分布模式，保证心正常发育。胚龄 11d 后， 神经嵴细胞已迁移到其预定部位，并向特定细胞方向分化。 关键词：心流出道，ISL-1 阳性细胞，第二生心区，神经嵴，免疫荧光 PAGE PAGE IV Association of neural crest cells and ISL-1 positive cells with outflow tract development of mouse embryonic heart Abstract Background: The primary heart tube is developed from cardiogenic mesoderm of embryonic disc of three germ layers, which is only the primordium of the left ventricle, while the right ventricle, outflow tract (OFT) and part of atria are formed by addition of cardiomyocytes from mesenchyme o