小鼠stgf-β1rⅱ sil-13rα2受体蛋白对日本血吸虫病肝纤维化细胞信号转导的干预-interference of stgf - β 1r ⅱ sil - 13rα 2 receptor protein on signal transduction of schistosoma japonicum hepatic fibrosis cells in mice.docxVIP

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2018-08-07 发布于上海
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小鼠stgf-β1rⅱ sil-13rα2受体蛋白对日本血吸虫病肝纤维化细胞信号转导的干预-interference of stgf - β 1r ⅱ sil - 13rα 2 receptor protein on signal transduction of schistosoma japonicum hepatic fibrosis cells in mice.docx

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小鼠stgf-β1rⅱ sil-13rα2受体蛋白对日本血吸虫病肝纤维化细胞信号转导的干预-interference of stgf - β 1r ⅱ sil - 13rα 2 receptor protein on signal transduction of schistosoma japonicum hepatic fibrosis cells in mice

中英文词汇对照表英文缩写PCR英文全名polymerasechainreaction中文全名聚合酶链反应cDNAcomplementaryDNA互补DNAE.coliEscherichiacoli大肠杆菌Ampampicillin氨苄青霉素Kanakanamycin卡那霉素LBluria-BertanimediumLB培养基ORFopenreadingframe开放阅读框SDSsodiumdodecylsulphate十二烷基磺酸钠PAGEpolyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺电泳TEMEDtetramethylethylenediamine四甲基乙二胺APSammoniumPersulfate过硫酸铵PBSphosphatebuffersaline磷酸盐缓冲液PBSTphosphatebuffersalinetween磷酸盐吐温缓冲液EDTAethylenediaminetetra-aceticacid乙二胺四乙酸HRPhorseradishperoxidase辣根过氧化物酶HSChepaticstellatecell肝星状细胞IL-13Rα2interleukin-13receptorα2白细胞介素13受体α2SEAsolubleeggantigen可溶性虫卵抗原STAT6signaltransducersandactivatorsoftransduction6TGFβ1RIItransforminggrowthfactorbeta1typeII信号转导和转录激活因子6转化生长因子β1II型受体receptorECMextracellularmatrix细胞外基质小鼠sTGF-β1RII、sIL-13Rα2受体蛋白对日本血吸虫病肝纤维化细胞信号转导的干预研究生周超群导师汪学龙教授储德勇副教授中文摘要目的：原核表达和纯化sTGF-β1RII蛋白、sIL-13Rα2蛋白，并研究该蛋白对小鼠日本血吸虫病肝纤维化及其信号转导通路的影响。方法：利用小鼠3T3细胞总RNA，逆转录为cDNA，设计引物，常规PCR法扩增目的基因，构建sTGF-β1RII、sIL-13Rα2蛋白的原核表达系统，在大肠杆菌中获得融合表达，用亲和层析法制备纯化的sTGF-β1RII蛋白、sIL-13Rα2蛋白，Westernblotting鉴定其抗原性。BALB/C雌性小鼠（6-8周龄，体重18-22g）随机分成8组，每组6只，除正常对照组外，其余各组均通过腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴18±2条/鼠，感染后第5周起隔天腹腔注射，持续2w，具体蛋白干预种类剂量见分组：A：正常对照组；B：模型生理盐水组（0.5ml生理盐水/小鼠）；C：sIL-13Rα2蛋白低剂量组（50μg/小鼠）；D：sIL-13Rα2蛋白高剂量组（100μg/小鼠）；E：sTGF-β1RII蛋白低剂量组（2μg/小鼠）；F：sTGF-β1RII蛋白高剂量组（20μg/小鼠）；G：联合干预组（sTGFβ1RII10μg/小鼠+sIL-13Rα275μg/小鼠）；H：sTGF-β1RII蛋白低剂量长疗程（干预4w）组（2μg/小鼠）；在感染后第8周末处死各组小鼠，取肝脏、碱裂解法测量肝脏羟脯氨酸（HYP）含量；苏木精-伊红(HE)和Masson胶原纤维染色法计算肝虫卵性肉芽肿面积和评价肝纤维化程度；抽取若干组小鼠（A、B、D、E组）的肺脏，测量肺脏羟脯氨酸含量，Masson染色评价肺纤维化程度；免疫组化染色观察肝组织Smads3、STAT6的表达情况。结果：成功克隆并用原核系统表达蛋白，纯化的sTGF-β1RII蛋白、sIL-13Rα2蛋白用Westernblotting证实，分别与小鼠TGF-β1RII、IL-13Rα2单克隆抗体进行特异性反应，具有良好的免疫反应性。在小鼠体内模型中，感染后第8周，从肝脏HYP水平、肝脏虫卵肉芽肿面积大小和纤维化程度比较，各组蛋白干预组小鼠都显著低于模型组（P0.01）；sTGF-β1RII蛋白高低剂量组之间，sIL-13Rα2蛋白高低剂量组之间比较都没有统计学差异；sTGF-β1RII蛋白低剂量长疗程组从肝脏HYP水平、纤维化程度比较都明显低于与其低剂量组（P0.01），而肝脏虫卵肉芽肿面积大小比较却没有统计学差异；单独应用sIL-13Rα2蛋白高低剂量组、sTGF-β1RII蛋白高剂量组分别与联合用药组相比，改善纤维化的程度都没有统计学差异，而sTGF-β1RII蛋白低剂量组与联合用药组相比，各纤维化指标也有所降低（肝脏HYP水平和肝脏虫卵肉芽肿面积大小P0.05，纤维化程度P0.01）；另外从抽取的各组小鼠肺脏HYP水平和纤维化程度来比较都没有统计学差异；各蛋白干预组其相应的Smads3或STAT6蛋白的表达水平显著低于