糖尿病大鼠创面组织中内皮细胞迁移vegfr-2信号通路的改变-changes of vegfr - 2 signaling pathway of endothelial cell migration in wound tissue of diabetic rats.docxVIP

PAGE PAGE 10 PAGE PAGE 13 糖尿病大鼠创面组织中内皮细胞迁移 VEGFR-2 信号通路的改变 中 文 摘 要 目的 观察糖尿病大鼠创面组织内皮细胞迁移 VEGFR-2 信号通路的变化，确定其作 用环节和效应靶点。 方法 1、按随机数字表法将 84 只 SD 大鼠分为糖尿病组(DM 组，42 只)和非糖尿病 对照组（C 组，42 只）；糖尿病模型稳定 8 周后建立深Ⅱ度烫伤模型，其中设假烫 糖尿病组（0 d，n=6）和假烫非糖尿病组（0 d，n=6）。 2、观察大鼠体重和 50%创面愈合时间，血糖仪检测尾静脉血糖变化，透明胶 纸描计计算创面愈合率，于烫伤后 0，1，3，7，10，14，21d，每时相点分别处死 6 只糖尿病组和非糖尿病对照组大鼠，留取创面皮肤组织。 3、蛋白酶 K 消化法检测皮肤组织糖含量，组织切片 HE 染色和 Masson’s 染色， 观察皮肤组织形态学变化。 4、ELISA 法检测创面组织中 VEGF、VEGFR-2、F-Actin、AGEs 的水平。 5、Western blot 法检测创面组织中 phospho-P38MAPK 表达；免疫组织化学方法 检测创面组织中 VEGFR-2（phospho-Tyr1214）、VEGFR-2（phospho-Tyr1175）、 VEGFR-2（phospho-Tyr951）、FAK、PI3K 的含量及 MVD 水平。 结果 1、与非糖尿病组相比，糖尿病创面组织局部糖含量明显升高（P 0.01），并与 血糖水平密切相关(r=0.848，P0.01)；局部创面组织高浓度 AGEs 蓄积（P 0.05）， 并随病程逐渐加剧，且创面愈合明显延迟（P 0.01）。 2、与非糖尿病组相比，糖尿病创面组织中 VEGF 及 VEGFR-2 表达水平明显升 高（P 0.05），微血管密度无明显差异（P 0.05）。 3 、 与 非 糖 尿 病 组 相 比 ， 糖 尿 病 组 phospho-Tyr1214 及其下游 信号 蛋白 phospho-P38MAPK 表达水平显著降低（P 0.05）。 4、与非糖尿病组相比，糖尿病组 phospho-Tyr951 表达水平显著降低（P 0.05）。 5 、与非糖尿病组相 比，糖尿病组 phospho-Tyr1175 表 达 水 平 无 明 显 差 异 （P 0.05），其下游信号蛋白 FAK 及 PI3K 表达水平显著降低（P 0.05）。 6、与非糖尿病组相比，糖尿病组 F-Actin 表达水平显著降低（P 0.05）。 结论 糖尿病创面难愈与创面组织中局部糖含量及 AGEs 增高有关；糖尿病创面难愈 与内皮细胞迁移信号通路中 VEGFR-2 位点 phospho-Tyr1214 和 phospho-Tyr951 及 VEGFR-2 下游信号蛋白 phospho-P38MAPK、FAK 和 PI3K 的表达减少有关。 关键词 VEGFR-2，糖尿病，创面愈合，内皮细胞，信号通路 Change of endothelial cell migration VEGFR-2 signal pathways in wound tissue of diabetic rats Abstract Objective To observe the change in endothelial cell migration VEGFR-2 signal pathways in wound tissue of diabetic rats, and to confirm its action links and effect targets. Method Eight-four SD rats were randomly divided into diabetes group (DM group, n=42) and non-diabetes group (C group, n=42) according to the random number table; the rats of the two group were produced the deep partial thickness scald on the dorsal skin at eight weeks post diabetes model stabilizing, of which 6 diabetes rats were acted as shame scald diabetes group(0d) and 6 non-diabetes rats were acted as shame scald non-diabetes group(0d). Th