温度和脂多糖对栉孔扇贝chlamys farreri血细胞免疫响应的影响-effects of temperature and lipopolysaccharide on immune response of chla mys farreri blood cells.docxVIP

万方数据 万方数据 温度和脂多糖对栉孔扇贝（Chhhhllllaaaammmmyyyyssssffffaaaarrrrrrrreeeerrrriiii））））血血血血细细细细胞胞胞胞免免免免疫疫疫疫响响响响 应的影响 摘要 本论文研究了不同养殖温度下，栉孔扇贝血细胞数量、血细胞吞噬活力的差异； 探讨了脂多糖刺激的最适浓度；检测了在同一养殖温度下，栉孔扇贝经过脂多糖 刺激后，其血细胞数量、血细胞呼吸爆发活力，血细胞内溶菌酶、酚氧化酶活力 的变化；深入研究了脂多糖和温度对栉孔扇贝血细胞吞噬活力的联合作用，旨在 为栉孔扇贝健康养殖以及血细胞吞噬作用研究提供参考。本论文主要包括以下三 部分: （1）不同饲养温度下，栉孔扇贝血细胞数量及吞噬活力的差异分析 : 在不同养 殖温度下（5 ℃、10 ℃、15 ℃、20 ℃、25 ℃），用血球计数板法检测了扇贝 血细胞数量的差异，荧光显微镜观察了血细胞吞噬活力的差异性，发现较低温度 （5 ℃、10 ℃）和较高温度下（25 ℃），扇贝血细胞数量少，个体间差异较大， 血细胞吞噬荧光微球的能力较弱，单个细胞只能吞噬 1-2 个荧光微球，透明细胞 和颗粒细胞都能吞噬荧光微球。适宜温度(15 ℃、20 ℃)下，血细胞数量多，个 体间差异小，血细胞吞噬荧光微球的能力较强，单个细胞能吞噬 1-12 个荧光微 球。 （2）脂多糖刺激后，扇贝血细胞数量和胞内酶活的变化 : 15 ℃下，用不同浓度 的脂多糖（0.5 mg/ml、1 mg/ml、2 mg/ml、3 mg/ml、4 mg/ml）刺激栉孔扇贝， 观察扇贝的生长状态，结果表明 0.5、1 和 2 mg/ml 为脂多糖刺激的适宜范围。 分别用浓度为 0.5、1.0 和 2.0 mg/ml 的脂多糖刺激扇贝后，每天测量每个浓度组 扇贝血细胞总数（THC）、血细胞呼吸爆发活力（RBA）、血细胞内溶菌酶（LSM） 及酚氧化酶活力（PoA），持续 7 天。结果显示， THC 在 0.5、1.0 和 2.0 mg/ml 组均显著升高，但是 1.0 mg/ml 组血细胞升高的持续时间长。三个浓度组对 RBA 的激活效果没有显著差异。在 0.5 mg/ml 组中，PoA 于第 2 天达到峰值 2.67 ± 0.19 U/mg protein/min；在 1.0 mg/ml 组中，其激活持续时间是从第 1 天到第 4 天， 于第 2 天达到峰值 3.86 ± 0.23 U/mg protein/min；在 2.0 mg/ml 组中于第 2 天达 到峰值 2.11 ± 0.21 U/mg protein/min。0.5 mg/ml 实验组中，血细胞的 LSM 活力 I 无显著变化；1.0 和 2.0 mg/ml 实验组中，扇贝血细胞 LSM 活力在 24，48 和 72 h 显著升高；1.0 mg/ml 实验组中血细胞 LSM 活力变化极显著，在 24，48 和 72 h 时，血细胞 LSM 活力分别达到 4.86 U/ml、5.17 U/ml、5.56 U/ml，而对照组血细 胞 LSM 活力仅为 2.36 U/ml。综合考虑，1 mg/ml 脂多糖是栉孔扇贝的最佳刺激 浓度。 （3）温度和脂多糖对栉孔扇贝血细胞吞噬力的影响：研究栉孔扇贝在 5 ℃、 10 ℃、15 ℃、20 ℃和 25 ℃下，分别注射荧光微球、脂多糖和荧光微球混合 液，利用流式细胞仪测定血细胞吞噬率，研究水温和脂多糖对血细胞吞噬活力的 影响。各养殖温度组血细胞吞噬率的结果表明：在 5 个养殖温度下，2 个处理组 均自 6 h 开始扇贝血细胞内即出现吞噬的微球，之后吞噬率开始逐渐上升，直到 18-24 h 达到最高峰，随后逐渐下降。5℃、10℃、15℃、20℃和 25℃组，注射荧 光微球组血细胞最大吞噬率分别为 8.66 ± 0.26 %、14.00 ± 0.22 %、16.97 ± 0.55 %、25.62 ± 0.88 %、8.97 ± 0.25 %，注射脂多糖与荧光微球混合液组分 别为 9.75 ± 0.48 %、17.49 ± 0.43 %、23.13 ± 0.57 %、34.16 ± 0.97 %、10.42 ± 0.45 %。20 ℃组血细胞吞噬率显著高于其他温度组，其次是 15 ℃组、10 ℃ 组，最低是 5 ℃和 25 ℃组，并且 20 ℃、15 ℃组最大吞噬率出现在 18 h，其 他组均在 24 h。各养殖温度组中，脂多糖和荧光微球混合液组血细胞吞噬率均高 于荧光微球组。 关键词：栉孔扇贝；血细胞；脂多糖；温度；吞噬率 II Effects of Water Temperature on the Immune Responses of Haemocytes in Chhhhllll