利用啤酒酵母提取RNA的氨法工艺研究论文.docVIP

目 录 0.题目…………………………………………………………………………………2 一.前言………………………………………………………………………………2 二.正文………………………………………………………………………………2 1.材料…………………………………………………………………………………2 2.方法…………………………………………………………………………………3 2.1啤酒酵母RNA含量的测定……………………………………………………… 3 2.2氨法破壁工艺……………………………………………………………………3 2.3沉淀提取RNA……………………………………………………………………4 2.4核酸纯度测定……………………………………………………………………4 3.结果…………………………………………………………………………………4 3.1啤酒酵母泥的核酸含量测定……………………………………………………4 3.2不同酵母浓度对RNA提取率的影响…………………………………………… 4 3.3不同氨浓度对酵母RNA提取率的影响…………………………………………5 3.4　分步沉淀法去除蛋白质试验…………………………………………………5 4.结论…………………………………………………………………………………6 三.致谢………………………………………………………………………………7 四.参考文献…………………………………………………………………………8 利用啤酒酵母提取RNA的氨法工艺研究 摘　要：采用氨法破壁提取RNA，当酵母质量分数为10%，氨为1.0%时，采用分步沉淀法，调蛋白质的等电点后，再加入复合蛋白质沉淀剂去除蛋白质，可获得纯度在83%的优质酵母RNA，核酸的提取率是干酵母的2%以上。 关键词：啤酒酵母；RNA；氨法工艺 Study on Beer Yeast RNA Extraction with Ammonia Method Abstract:The cell wall of beer yeast was broken with ammonia method. The best yeast and ammonia concentration for breaking cell was 10% and 1.0% respectively. The protein was removed by regulating the isoelectric point and chemical agents . Then the high quality yeast RNA with the purity of 83% was obtained. Key Words:Beer yeast, RNA, Ammonia, Process 　　 一、前言 酵母含有的较高的核酸（RNA），在医药、食品、化妆品以及农业等行业都有重要的用途。随着我国啤酒业的日益发展，啤酒厂淘汰的废弃啤酒酵母泥不断增多。综合利用大量的废弃啤酒酵母泥提取核酸，不仅可以增加经济效益，还能解决饲料酵母存在高核的问题。RNA的提取方法多有报导［1～3］，但国内用氨法破壁提取核酸的方法较为罕见。目前工业上常用的方法是：食盐法、混合盐法以及氢氧化钠破壁法［4］。 由于被淘汰的啤酒酵母菌龄较老，蛋白含量较高而核酸含量较低，因此采用工业上常用的一次沉淀提取工艺［4］，难以获得高纯度的优质核酸（RNA企业质量：经定磷法测定RNA含量≥80%，水分≤8%为优质品，RNA含量≥70%，水分≤8%为一级品）［1］。我们就淘汰的啤酒酵母进行氨法提取工艺研究，旨在为大工业化生产提取核酸，提供切实可行的工艺。 二、正文 1　材　料 啤酒酵母泥：在徐州工业职业技术学院生物化工实验中心培养，酵母培养基的配制为10克葡萄糖+300ml水+30克干酵母，用葡萄液培养,在1000ml的地烧杯里加10克葡萄糖和100ml蒸馏水中，加热置煮沸，取出冷却置25℃以下，才可以将30克干酵母倒入葡萄糖液培养基中，用玻璃棒稍加搅拌均匀后，然后把烧瓶放在 25～30℃的恒温恒湿箱培养，然后经离心，酵母含水量为75%～78%左右。 　　标准啤酒酵母RNA：生化试剂，上海生化试剂厂。 　　氨水：化学纯（含量25%～28%，），福建三明化工厂产品。 　　三氯乙酸：化学纯，北京化工厂。 　　三氯化铁：化学纯，北京化工厂。 2　方　法 2．1　啤酒酵母RNA含量的测定 　　高氯酸法：称取一定量的酵母泥，用5%高氯酸在100℃条件下水解破壁15 min，3600 r/min离心15 min，取其上清液，用752-G紫外分光光度计测定，波长260nm、280nm，石英比色皿，光程1cm。 　　研磨破碎法：称取