lacz-β-半乳糖苷酶课件.ppt

第三章 基因工程载体;作为一个理想的载体，应具备以下条件： ;载体的种类：;第一节 质 粒;一、质粒的一般特性;(二)质粒DNA的构型;单链切割;(三)质粒DNA的理化性质;(四)质粒DNA的生物学特性;(6)传递性：有些质粒在细菌间能够传递，具有传递性的质粒带有一套与传递有关的基因。 (7)消除性：存在于宿主细胞中的质粒，可用某些办法将其去除。 (8)复制类型：严紧型质粒的复制受到宿主细胞蛋白质合成的严格控制，松弛型质粒的复制不受宿主细胞蛋白质合成的严格控制。 (9)表现型：不同的质粒有不同的表型。如对抗生素的抗性等。;(五)质粒的命名原则;二、组建理想质粒载体必须具备的条件;根据宿主细胞所含的拷贝数多少，可将质粒分成：;(二)分子量较小;(三)带有可供选择的标记;β-半乳糖苷酶筛选系统：;lacZ;a-互补显色反应（蓝白斑筛选）;互补显色反应 ;(四)带有尽可能多的单一限制性??切位点;(五)具有复制起始点(origin, ori);三、常用的质粒载体;1.质粒;;2.pUC质粒载体;pUC18 / 19： ;pUC18质粒载体;(2)便于重组子的检测:;lacZ’;pUC18 / 19：正选择标记 lacZ’ 的显色原理;(3)具有多克隆位点(MCS)区段;pGEM-3Z：;(二)表达载体;1. pKK表达质粒载体 ;外源DNA可有3种插人法 ①将Nco I