甜樱桃果实中五个乙烯信号转导基因克隆及其表达-cloning and expression of five ethylene signal transduction genes in sweet cherry fruit.docxVIP

MS NR Murashige and skoog medium Never-ripe MS 培养基 永不成熟 ORF Opening reading frame 开放阅读框 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链式反应 RACE RT-PCR SDS Rapid amplification of cDNA ends Reverse transcription-polymerase chain reaction Sodium dodecyl sulfate 快速扩增 cDNA 末端 反转录-聚合酶链式反应 十二烷基磺酸钠 SAM Tris S-adenosylmethionine Hydroxy-methyl-amino methane S-腺苷蛋氨酸 三羟甲基氨基甲烷 X-gal 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactoside 5- 溴 -4- 氯 -3- 吲哚 - β -D- 半 乳糖 关于学位论文原创性和使用授权的声明 本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所 取得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个 人或集体，均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。 本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定，同 意学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子 版，允许论文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论 文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印 或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。 保密论文在解密后应遵守此规定。 论文作者签名： 导 师 签 名： 日 期： 山东农业大学硕士学位论文 山东农业大学硕士学位论文 甜樱桃果实中五个乙烯信号转导基因的克隆及其表达 甜樱桃果实中五个乙烯信号转导基因的克隆及其表达 PAGE PAGE 13 PAGE PAGE 10 1 前言 果实是人们重要的食物来源，可以提供纤维素、矿物质、维生素及抗氧化剂等多种 有益营养成分。果实的许多成熟特性会造成质量属性的降低，主要表现在：成熟过程中 导致的果实硬度和贮运性能力的下降及果实整体对病原微生物侵染抵抗力的减弱，以及 食用价值的降低等。果实成熟的遗传基因工程技术提高的动力主要是来自消费者对产品 的成熟特性、品质和营养等多方面属性的更高需求。 果实成熟是指果实生长发育停止后发生的一系列生理生化变化的综合过程，包括乙 烯的生物合成，果实内部的淀粉含量下降，可溶性糖含量上升，有色物质和水溶性果胶 含量增加，果实硬度和叶绿素含量变化，果实特有的色香味出现等。近年来，借助于拟 南芥、甜瓜、番茄等模式植物一些研究成果和转基因等技术手段，果实成熟的分子生物 学，特别是与乙烯作用相关的果实成熟机理及其控制方面取得了很大进展。分子生物学 研究表明果实的成熟受基因调控。果实成熟的分子生物学研究，不仅在果实成熟的生理 机制的理论研究上具有重要意义，而且可以在实践中人为的调控这个过程，以获得储藏 性好、品质优良的品种。 乙烯在植物生长发育过程中起重要作用，对植物的种子萌发，性别分化，花和叶片 的衰老脱落、果实成熟衰老等（Bleecker Kende，2000；潘瑞炽，2002）有着重要影 响。乙烯作为植物成熟衰老激素已无可争议，古埃及已有应用针刺促进无花果成熟的记 载，这就是利用损伤产生乙烯的作用。乙烯对果实的成熟促进作用包括诸多方面，如淀 粉水解，有机酸变化，硬度下降，香气增加，涩味消失和色泽变化等。这一系列变化的 基础是乙烯的诱导作用，从而导致果实成熟过程中在mRNA和蛋白质表达水平上发生变 化。随着拟南芥乙烯信号转导途径的建立，果实在成熟过程中乙烯作用的机理研究也开 始深入到分子水平（Adams-Phillips et al.，2004；殷学仁等，2009）。 1.1 乙烯与果实成熟衰老 乙烯是调控跃变型果实成熟所必需的、分子结构极简单的物质。这已经在包括乙烯 生物合成和感受抑制剂的分析、改变乙烯生物合成的转基因植物生理特性变化、以及通 过分析番茄永不成熟突变体 Nr（Never ripe）等诸多方面被证实。 20 世界 70 年代末，Yang 等首先确定了植物体内乙烯生物合成途径，即：蛋氨酸→ 甲基腺苷蛋氨酸 (SAM, S-adenosylme-thionine) → 1- 氨基环丙烯 -1- 羧酸 (ACC, 1-aminocycloproPacne-1-carbosylic acid)→乙烯，其中 ACC 合成酶(ACS) 催化 SAM 合 成 ACC，ACC 氧化酶（ACO） 则将 ACC 转变为乙烯，它们是调控乙烯合成的关键酶 （Yang Hoffman，1984