褪黑素对人胃癌细胞sgc-7901的抑制作用及其对survivin livin表达的影响-inhibitory effect of melatonin on human gastric cancer cell sgc - 7901 and its effect on survivin expression.docxVIP

PAGE PAGE 1 褪黑素对人胃癌细胞 SGC-7901 的抑制作用 及其对 survivin、livin 表达的影响 摘 要 目的 观察褪黑素对人胃癌细胞 SGC-7901 细胞增殖和凋亡的影响，并通过研究 其对凋亡抑制蛋白 survivin 和 livin 的调控，探讨褪黑素促进胃癌细胞凋亡的一 些可能的机制。 方法 ① 建立人胃癌细胞 SGC-7901 细胞褪黑素干预模型：人胃癌细胞 SGC-7901 传代培养，按褪黑素干预浓度不同分为 5 个组，1mM 组、2mM 组、 3mM 、4mM 组、5mM 组，并设立空白对照组。褪黑素干预 24h。 ② CCK-8 法观察褪黑素干预对培养胃癌细胞生长的影响。 ③ 应用流式细胞术检测褪黑素干预后各组细胞的凋亡率。 ④ 应用 TUNEL 法检测褪黑素干预后各组细胞的凋亡率。 ⑤ 应用免疫组织化学染色和图像分析软件分析比较各组细胞 survivin 和 livin 的表达情况。 ⑥ 应用蛋白免疫印迹（western bolt）技术和图像分析软件分析各组细胞 survivin 和 livin 蛋白表达量的变化。 ⑦ 应用实时荧光定量 PCR 比较分析各组细胞 survivin 和 livin 的 mRNA 表 达变化。 结果 ① CCK-8 结果显示褪黑素干预下各组胃癌细胞生长受到抑制，呈剂量依赖 性。 ② 流式细胞术结果显示随着褪黑素浓度增高,肿瘤细胞的凋亡率增加；与 对照组相比，3、4、5mM 组结果有统计学意义。 ③ TUNEL 结果显示随着褪黑素浓度增高，肿瘤细胞凋亡率增加，与对照 组相比，结果有统计学意义，与流式细胞术结果基本一致。 ④ 免疫组化结果显示，各褪黑素干预组 survivin 阳性肿瘤细胞平均光密度 值减少，与对照组相比，除 1mM 外，各组均有显著性差异；褪黑素各 干预组 livin 阳性肿瘤细胞平均光密度值减少，与对照组相比，除 1mM 外，各组均有显著差异。 ⑤ Western bolt 结果显示，各褪黑素干预组肿瘤细胞 survivin 蛋白表达减 少，与对照组相比，除 1mM 组外，各组均有显著性差异；各褪黑素干 预组 livin 蛋白表达减少，与对照组相比，各组均有显著性差异。 ⑥ 实时荧光定量 PCR 结果显示，各褪黑素干预组肿瘤细胞 survivin mRNA 表达减少，与对照组相比，除 1mM 外，各组均有显著性差异；各褪黑 素干预组 livin mRNA 表达减少，与对照组相比，各组均有显著性差异。 结论 人胃癌细胞 SGC-7901 经褪黑素干预 24h 后，肿瘤细胞生长受到抑制，出现 凋亡，呈剂量依赖性；同时，凋亡抑制蛋白 survivin、livin 基因的转录、翻译、 表达水平都有不同程度的下降，大体呈剂量依赖性。表明褪黑素具有下调 survivin、livin 表达的作用。褪黑素下调 survivin、livin 的表达，可能是其抗肿瘤 的机制之一。 关键词: 人胃癌细胞 SGC-7901 褪黑素 survivin livin Inhibitory effect of melatonin on human gastric carcinoma cell SGC-7901 and its impact on expression of survivin and livin Abstract Objective To investigate the effect of melatonin on proliferation and apoptosis of human gastric carcinoma cell SGC-7901, to explore some probable mechanisms of melatonin-mediated of tumor cell’s apoptosis by analyzing the expression change of survivin and livin. Methods ① Mode of human gastric carcinoma cell SGC-7901 treated with melatonin was established : human gastric carcinoma cell SGC-7901 was subcultured; The cell in the exponential phase were divided into 5 groups according to the different concentration of melatonin , 1mM group，2mM group，3mM group，4mM group，5mM