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5―氨基乙酰丙酸对油菜幼苗抗冷性和抗氧化系统影响 　　摘要：以油菜品种沪油15为材料，叶面喷施30 mg/L 5-氨基乙酰丙酸（ALA）4 d，再置于4 ℃低温条件下处理 8 d，分析测定了低温处理0、4、8 d及恢复 4 d后光合色素含量及SOD、CAT、APX、POD等抗氧化酶活性、脯氨酸含量、超氧阴离子（ O-2? ）生成速率及MDA含量等生理指标，研究了ALA对油菜幼苗抗冷性的影响及作用机制。结果表明，低温胁迫下，喷施ALA明显缓解了油菜叶片叶绿素a（Chl a）、叶绿素b（Chl a）和总叶绿素（Chl）含量的下降程度，增加了类胡萝卜素（Car）的含量，显著提高了SOD、CAT、APX和POD的活性和脯氨酸的含量，降低了O-2? 生成速率和MDA含量的上升幅度。低温胁迫时间越长，ALA的作用效果越明显，说明喷施ALA通过促进叶绿素的合成，提高油菜植株的抗氧化能力，降低活性氧的产生，减少膜脂过氧化的伤害程度，从而提高了油菜幼苗的抗冷性。另外，喷施ALA可以促进油菜幼苗在受到低温伤害后迅速恢复。 　　关键词：油菜；低温胁迫；5-氨基乙酰丙酸；叶绿素；类胡萝卜素；抗氧化酶；脯氨酸 　　中图分类号： S634.301文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）02-0052-03 　　收稿日期：2013-07-23 　　基金项目：国家自然科学青年基金（编号。 　　作者简介：张治平（1982―），女，河南洛阳人，博士，主要从事蔬菜逆境生理和分子生物学研究。E-mail：zhangzp0422@163.com。油菜（Brassica napus L.）作为一种重要的油料作物，种植极为广泛，遍及世界各地，我国油菜种植面积和产量均居世界第一位[1]。油菜是越冬作物，低温已经成为影响其正常生长的主要限制因子，冬春季持续低温冻害极易引起油菜叶片变黄、干枯、花蕾脱落、开花而不结实，一些严重冻害甚至可能造成整株死亡，导致油菜绝收，给油菜生产造成严重损失[1-2]。因此，提高油菜的耐低温能力越来越为人们所关注。 　　5-氨基乙酰丙酸（ALA）是所有生物体内卟啉化合成的关键前体[3]，低浓度时，ALA能够促进叶绿素（Chl）合成，调节植物生长发育，提高多种植物的抗冷性[4-7]。据报道，ALA显著提高西瓜植株生长量，增强植株抵抗低温弱光的能力[4]。沈奇等研究表明，ALA可以促进辣椒Chl的合成，增强光合作用，提高渗透调节物质含量和提高SOD、CAT和POD活性，维持膜系统的稳定性，从而缓解低温胁迫对辣椒的伤害[5]。但是，喷施ALA提高油菜幼苗耐低温能力的研究尚鲜有报道。为此，本研究以油菜为试验材料，分析在4 ℃低温胁迫下，喷施ALA对油菜叶片Chl和类胡萝卜素（Car）含量、抗氧化酶活性、游离态脯氨酸含量、 O-2? 生成速率和MDA含量的影响，研究ALA提高油菜幼苗抗冷性的原因，以期为油菜生产提供技术支持。 　　1材料与方法 　　1.1供试材料与培养 　　本试验以油菜品种沪油 15为材料。挑选饱满的种子，用70%乙醇浸泡1 min，25%次氯酸钠消毒10 min，蒸馏水冲洗3次。37 ℃暗培养出芽后，播种于营养钵中。营养土配制为蛭石 ∶黑土 ∶珍珠岩=18 ∶6 ∶1；培养条件设定昼/夜温度为 （25±1） ℃/（15±1） ℃，光周期为16 h/8 h（昼/夜），光强为 300 μmol/（m2?s）。育苗期间正常管理，按照需要施肥和浇水。 　　1.2试验处理 　　油菜幼苗培养至5叶1心期，选取生长一致的植株，用30 mg/L的ALA溶液喷施，并设清水对照。喷施时溶液中添加 0.01% Triton，均匀地喷洒叶片的正反面，以叶片滴水为喷施标准。ALA处理后4 d，放入人工气候箱中进行低温处理，温度为4 ℃，光照条件和培养期间相同。低温处理 8 d，之后转移至昼/夜（25±1） ℃/（15±1） ℃温度条件下，恢复 4 d。低温处理0 d、4 d、8 d及恢复 4 d时分别取完全展开的第4、第5片真叶测定有关生理指标。 　　1.3试验方法 　　1.3.1叶片光合色素含量的测定采用乙醇浸提法提取并测定油菜叶片Chl和Car的含量[8]。 　　1.3.2抗氧化酶活性测定SOD 活性测定采用氮蓝四唑（NBT）光还原法[9]，以抑制反应50%为1个酶活力单位（U）；CAT活性测定采用紫外吸收法，以1 min D240 nm值减少0.01为1个酶活力单位（U）[10]；APX 活性测定参照Nakano等的方法[11]；POD 活性测定采用愈创木酚法[12]。 　　1.3.3 O-2? 生成速率和MDA含量测定O-2?生成速率测定采用α-萘胺法[13]；MDA含量的测定用硫代巴比妥酸