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3D人造皮肤模型在化妆品安全性功效性评价中应用 　　人类皮肤覆盖于整个体表，被称为生命之裳，不仅因为皮肤保护我们的肌肉和内脏免受环境中有害物质的侵害，还源于它的重要审美价值。人类追寻美丽的步伐从未停止过，《齐民要术》里就有各种关于如何配制护肤品的记载。进入21世纪，随着我国人民生活水平的不断提高，化妆品已经成为人们的生活必需品。如何保障化妆品的安全性和功效性，是政府监管部门、化妆品公司和消费者共同关注的问题。 　　在过去的三十年，化妆品的安全性检测主要依靠动物试验，然而动物试验遭到动物保护组织的强烈反对。欧盟自2013年起，全面禁止出售和进口基于动物试验的化妆品或原料。化妆品的功效性检测一般是通过体外细胞试验实现，不过鉴于人体皮肤组织的复杂性，简单的体外细胞模型很难反应真实情况。 　　3D-人造皮肤模型为化妆品安全性、功效性评价提供了新的技术手段。3D-人造皮肤模型是将人的正常皮肤细胞培养于特殊的插入式培养皿上，得到具有三维结构的皮肤组织模型。如图1，其表面形成角质层暴露于空气中，可以将受试化妆品直接滴加在表面，模拟了将化妆品涂抹于局部皮肤表面的过程；基层细胞依靠底部培养基维持生长。3D-人造皮肤模型因为其组织结构和生理功能与正常皮肤组织十分相似，而成为良好的皮肤替代模型，并且在近年来被广泛应用。目前商品化的3D-人造皮肤模型可以分为3类：表皮模型、全皮模型和黑色素皮肤模型。本文针对这3种模型，简单介绍它们在化妆品安全性和功效性评价中的应用。 　　1 表皮模型 　　表皮模型顾名思义，与人类的表皮结构相似，仅由角质细胞构成，包括基底细胞层、棘细胞层、颗粒层和角质层。使用表皮模型替代动物试验，进行化妆品及其原料的腐蚀性、刺激性检验，已经得到欧洲替代方法研究中心（European Centre for the Validation of Alternative Methods，ECVAM）的认可，经济合作与发展组织（Organization for Economic Co-operation and Development， OECD）也颁布了相应的试验指南（OECD Testing Guideline 431439）。另外，ECVAM正在审批使用表皮模型进行皮肤光毒性检测。 　　1.1 皮肤腐蚀性、刺激性检测 　　检测化妆品的皮肤毒性是安全性评价中的重要组成部分。将表皮模型用于皮肤腐蚀性、刺激性检测，能很好地模拟化妆品渗透皮肤进入机体进而产生毒性的过程，而且操作简便，只需将受试品滴加于模型表面，孵育相应时间，再使用MTT法检测细胞活率，即可将腐蚀性、刺激性这类描述性词语，转换为具体的数据进行判断。不仅保证了动物福利，而且过程更简捷，结果更准确。 　　1.2 皮肤光毒性检测 　　光毒性是指皮肤接触化学物质后，再与紫外线接触而产生的皮肤毒性反应。很多特殊用途化妆品，比如防晒霜，烫发、染发产品，它们的原料中都可能含有可产生光毒性的化学物质。使用表皮模型进行光毒性检测，其过程是先将受检物滴加于模型表面，然后暴露于一定照射剂量（通常为1.7 mW/cm2）的紫外线下一个小时，再使用MTT法检测细胞活率。 　　2 全皮模型 　　人类皮肤包括表皮、真皮和皮下组织三个部分。真皮层含有成纤维细胞和胶原纤维，成纤维细胞与表皮中的角质细胞相互作用，促进角质细胞分裂、分化；胶原纤维为皮肤提供弹性。全皮模型包括表皮与真皮两部分，表皮部分与表皮模型相似，真皮部分是由成纤维细胞和胶原基质组成。全皮模型在结构上与皮肤更相似，适合进行抗衰老、保湿等化妆品功效性研究。 　　2.1 抗衰老 　　抗衰老是国内外化妆品功效研究的热门课题。衰老的明显特征为皱纹产生和皮肤松弛，表现为表皮真皮连接处变平、弹性纤维和胶原纤维减少等情况。人类全基因组表达谱绘制的完成，帮助研究者鉴别出在皮肤老化过程中起关键作用的因子，如胶原蛋白、弹性蛋白、纤连蛋白和炎症介质等。使用全皮模型做为抗衰老评价的体外模型，其优势有两个：第一，全皮模型具有角质层，可以将化妆品涂抹在上面，模拟化妆品作用于皮肤局部的过程；第二，全皮模型具有活的角质细胞、成纤维细胞，其生理功能与真实皮肤组织中的细胞相似，因此可以检测抗衰老关键基因、蛋白的表达情况，从分子生物学角度评价化妆品的功效。 　　2.2 保湿作用 　　保湿是指通过使用相应化妆品维持肌肤，尤其是面部肌肤的含水量。保湿对于皮肤而言非常重要，因为皮肤与空气直接接触，水分非常容易流失。研究者发现人体皮肤中存在许多具有保湿作用的因子。如果在皮肤表面添加这些保湿因子，是否可以起到保湿作用呢？全皮模型为证明研究者的假设提供了有效的技术手段。 　　以透明质酸为例，研究者发现，透明质酸在表皮中负责保持皮肤的水分和弹性。随着年龄的增长，表皮中的