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BIOLOG在土壤微生物群落功能多样性研究中应用 　　摘 要 一直以来，微生物的研究人员都无法解决关于微生物群落实验中的一些技术问题。BIOLOG技术的出现，为研究人员提供了新的研究思路。为了更好地描述土壤的微生物群落所具有的多样性功能，生物学家致力于对该实验的研究。BIOLOG技术是一种比较简单且快捷的研究方法，能够为研究人员提供比较基础的培养方法，使微生物在实验中反映出微生物群落的代谢多样性。笔者从BIOLOG技术释义角度出发，深入研究了实验研究的相关原理，找出了实验中将会存在的问题，并给出了合理的解决措施，期望能够为土壤的微生物群落实验提供借鉴。 　　关键词 BIOLOG技术；土壤；微生物群落；功能多样性；应用分析 　　中图分类号：S714.6 文献标志码：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2016.21.144 　　近年来，生物学家在土壤方面的微生物群落的相关研究中采用BIOLOG技术，该种技术有助于提高生物反应的灵敏度，并促使研究人员能够更加清楚地分辨这些变化。而在BIOLOG技术下的微生物研究不需要采用分离的方式来培养纯种的微生物，能够保留住微生物的群落原有的特性。研究人员在BIOLOG技术的支持下清晰地记录下生物反应的相关数据，并在计算机中存储研究数据及研究结果。该种技术能够在很大程度上提高研究人员的研究效率，并使微生物研究的成功率提高。 　　1 BIOLOG技术释义 　　BIOLOG技术是由美国一家叫做BIOLOG的公司在1989年开始研发的，当时该公司将95种唯一碳源放在一起，进行了生物化学反应的相关测试。而该技术就是在该种研究中被应用[1]。BIOLOG技术最早用于对纯种的微生物鉴定。后来研究人员已经能够体会BIOLOG技术在生物研究中所带来的益处，将该技术运用到更多的领域当中。如今，BIOLOG技术已经能够用于鉴定细菌、霉菌等多种病原微生物。Garland和Mill两位生物研究人员在1991年将BIOLOG技术的应用领域再一次拓展，在土壤的微生物研究中采用了该种技术，并研究了微生物的群落是怎样的生物反应。 　　2 BIOLOG技术在土壤的微生物群落的功能研究原理 　　BIOLOG技术的研究载体是一个拥有多达96个孔洞的微孔板。在研究的过程中，研究人员通常会将其中的95个孔都加入不同的单一碳源并在其中添加四唑染料。那么，在微孔板中还剩余一个孔，研究人员利用剩余的一个孔进行对照试验，在保障该孔洞不被加入碳源的同时，加入适量的水，以此来观察该对照孔洞与其他孔洞的不同[2]。在微生物与该微孔板连接时，微生物将会与孔洞中的原料发生不同的反应。其中添加了碳源的孔洞将会产生氧化还原现象，而孔洞中的四唑染料也将在微生物的作用下变成紫色。此实验能够为研究人员提供一定的数据，表示该微生物能够利用该种碳源。BIOLOG技术已经建立了包括1 449种细菌信息的数据库，该数据库能够为利用BIOLOG技术的研究人员提供关于鉴定微生物是否被分离纯化的结果信息。而当Garland和Mill两位研究人员将该技术运用到土壤的微生物研究中时，BIOLOG技术将以相似的原理来显示关于土壤微生物的群落多功能性的鉴定结果，并帮助研究人员分析土壤的微生物群落是否存在代谢多样化的现象。 　　3 BIOLOG技术在土壤的微生物群落的多样性功能研究中存在的问题 　　基于BIOLOG技术的突然微生物的功能多样性研究尽管在很早以前就已经有研究人员研究实验，但时至今日，该研究还是会存在着一定的问题。 　　在对土壤的微生物群落研究当中，研究人员需要根据不同产生地点或者在同一地点，但在不同时间产生的微生物的物种来进行不同BIOLOG技术下微孔板的相关实验[3]。在实验当中，微孔板中不同的培养基其微生物的细胞活跃度也将产生不同的反应。而研究人员不仅需要清晰且有规律地记录下每种反应结果的相关数据，还要观察微孔板中不同孔洞的四唑染料颜色变化，如此才能正确判断出土壤的微生物群落的功能。当然，在土壤的微生物群落实验当中并不能很容易地判断实验结果，多种微生物在不同的微孔板中其颜色反应及其他的生物细胞反应都不一样，也不是研究人员通过将数据简单的相加就能够计算出不同的生物群落所具有的功能性。这些反应的密度十分大，研究人员需要时刻的观察该类反应的变化，而细胞本身是非常微小的事物，其变化的时间不确定，不同的培养基内的微生物变化现象也不同。因此，研究人员在BIOLOG技术下的土壤微生物研究会产生诸多问题。 　　一些研究人员会因为来不及观察培养基中微生物的细微变化，而使实验数据记录出现错误，有些研究可能会由于研究过程中的相关物质添加不准确而造成实验失去意义[4]。实验过程中还可能引发的问题是研究人员来不及确定培养基的时间度读数，因此而