硫丹检测试剂盒使用说明1检测原理该试剂盒基于免疫学中抗原抗体.DOCVIP

硫丹检测试剂盒使用说明 1.检测原理 该试剂盒基于免疫学中抗原抗体的反应原理制成。硫丹抗体包被于酶标板孔中，样品中存在的硫丹能与硫丹酶标记物竞争性地结合板中定量的抗体，采用直接竞争酶联免疫吸附法检测硫丹。 1.1 含有硫丹的样品提取液加到包被有抗体的酶标板中，同时加入硫丹酶标记物，两者竞争性的结合抗体结合位点。 1.2 混合物室温放置60分钟，然后将未结合的物质洗掉。 1.3 将底物溶液加入酶标板中，与酶作用后显色。 因为酶标板每孔包被有相同量的抗体，每孔将会结合等量的游离抗原及酶标记抗原，当样品中含有较多的硫丹时，每孔抗体结合的酶标记抗原的量则少，酶显色后的颜色则浅，反之，颜色深，因此颜色深浅与样品中待检抗原的量成一定相关性。 2.产品特性 该试剂盒适用于有机氯农药硫丹的快速检测，不能检测其他种类农药。适于土壤，水，蔬菜，水果，茶叶，烟草，畜肉，虾等试样。 3.试剂盒组成 硫丹标准溶液(10ug/mL) 硫丹酶标记物 掩蔽剂浓缩液（注：每次使用前需用PBS溶液1：20稀释得到掩蔽剂稀释液） 酶底物A液、B液 5ⅹPBS溶液 洗涤液（注：每次使用前需用Millipore超纯水1：5稀释） 包被有硫丹特异抗体的96孔酶标板一个（12*8） 4.试剂盒未提供而检测需要的其他试剂及设备 4.1仪器 酶标仪(含450nm,650nm) 单道微量移液器：1-20 uL，200－1000 uL 和1000－5000 uL 多道移液器：50－200 uL 振荡器：用于样品提取 玻璃器皿：玻璃瓶，试管，量筒 洗板机或洗瓶：用以冲洗酶标板 涡旋混合器 4.2试剂 终止液： 1.25M硫酸 掩蔽剂稀释液：将试剂盒提供的掩蔽剂浓缩液用PBS溶液1：20稀释 磷酸盐缓冲液PBS：13.8g Na2HPO4.12H2O ，1.6 g NaH2PO4.H2O，9.0 g 溶液Ⅰ：含10％甲醇的掩蔽剂稀释液 5. 样品处理 5.1前处理 干燥产品：将样品全部磨碎，四分法缩分。 水果蔬菜类：如有泥沙，先用水洗掉，然后除去表面附着的水分，取食用部分，沿纵轴剖开，切成四等分，取相对的两块，切碎，混匀。 5.2提取 红豆，绿豆，芹菜：称取10g粗粉碎样品到玻璃瓶中，加入50mL甲醇，机械振荡（250rpm/min）提取1小时。静置，吸取少量上清液用掩蔽剂稀释液稀释20倍后进行测定。 水果：称取10g粗粉碎样品到玻璃瓶中，加入50mL甲醇，机械振荡（250rpm/min）提取1小时。静置，吸取少量上清液用掩蔽剂稀释液稀释20倍后进行测定。 蔬菜（大白菜，蒜，葱，茼蒿，小松菜，甘蓝，芦笋）：称取5g粗粉碎样品到玻璃瓶中，加入25mL甲醇，机械振荡（250rpm/min）提取过夜。静置，吸取少量上清液用掩蔽剂稀释液稀释10倍后进行测定。 胡萝卜：称取5g粗粉碎样品到玻璃瓶中,加入25mL甲醇，机械振荡（250rpm/min）提取过夜。静置,吸取少量上清液用掩蔽剂稀释液稀释15倍后进行测定。 牛肉,羊肉,鸡肉：称取10g粗粉碎样品到玻璃瓶中，加入20mL甲醇，涡旋剧烈混合2min，过滤,吸取少量上清液用掩蔽剂稀释液稀释10倍后进行测定。 姜,毛豆:称取10g粗粉碎样品到玻璃瓶中,加入20mL甲醇,机械振荡(250rpm/min)提取1小时。静置,吸取少量上清液用掩蔽剂稀释液稀释50倍后进行测定。 花生：称取10g粗粉碎样品到玻璃瓶中，加入20mL甲醇，机械振荡（250rpm/min）提取1小时。25℃，4800r/min下离心5min， 菠菜：称取5g粗粉碎样品到玻璃瓶中，加入25mL甲醇，机械振荡（250rpm/min）提取过夜。静置,吸取少量上清液用掩蔽剂稀释液稀释80倍后进行测定。 茶叶：称取5g粗粉碎样品到玻璃瓶中，加入25mL甲醇，机械振荡（250rpm/min）提取过夜。静置，吸取少量上清液（一般为20uL-50uL）用掩蔽剂稀释液稀释900倍后进行测定。 烟草：称取10g粗粉碎样品到玻璃瓶中,加入50mL甲醇，机械振荡（250rpm/min）提取1小时。静置,吸取少量上清液用掩蔽剂稀释液稀释200倍后进行测定。 鳗鱼：取5g 待测样，搅碎后加入10ml甲醇，漩涡混匀提取2 min，用滤纸过滤；取滤液，用掩蔽剂稀释液稀释40倍。 虾：称取10g待测样，搅碎后加入20g无水硫酸钠搅匀，再加入20ml丙酮和1.04M硫酸锌溶液、0.36M亚铁氰化钾各200μl，漩涡混匀提取2 min；25℃ 注：1.此方法需要阴性样做标准曲线。阴性样处理方法同待测样，梯度稀释方法可参考6.1.2硫丹标准溶液的稀释，以阴性样品溶液代替溶液Ⅰ。 6．分析步骤 检测前将所有的试剂和待测样品放置至室温，在操作过程中，不要将底物暴露在阳光下。 6.1试剂准备 6.1.1按4.2中试剂配