MMP―2MMP―9在口腔黏膜白斑中表达研究.docVIP

MMP―2MMP―9在口腔黏膜白斑中表达研究 　　【摘要】 目的：检测基质金属蛋白酶2、9（matrix metalloproteinase 2、9，MMP-2、9）在口腔正常黏膜、白斑上皮单纯性增生及异常增生中的表达，探讨其与白斑不同增生程度间发生发展的关系。方法：选取正常口腔黏膜15例，白斑单纯性增生31例，白斑异常增生35例，应用MMP-2、MMP-9抗体行免疫组化染色并进行统计学分析。结果：MMP-2、MMP-9均表达在细胞浆，在上皮内两者的阳性率在上述三组中分别为20.0%、22.6%、34.3%和6.7%、9.7%、34.3%，在上皮下成纤维细胞中两者的阳性率在上述三组中分别为0、12.9%、14.3%和6.7%、25.8%、80.0%。MMP-2在上皮内、成纤维细胞的阳性表达在三组间差异无统计学意义（P0.05）。MMP-9在上皮内及上皮下成纤维细胞的阳性表达在白斑异常增生组中明显高于正常组织和白斑单纯增生组（P0.05）。结论：MMP-9可能参与了白斑发生发展的过程。 　　【关键词】 口腔黏膜白斑； 基质金属蛋白酶-2； 基质金属蛋白酶-9； 免疫组织化学 　　白斑属于癌前病变，已有报道其进展为鳞状细胞癌与上皮异常增生的严重程度有直接的关系[1]，但目前还没有一个明确的生物学指标来评估这一恶变[2]。基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）是一种Zn2+依赖性的中性蛋白水解酶，可降解和塑造细胞外基质（extracellular matrix，ECM），维持细胞外基质的动态平衡，参与恶性肿瘤的发生及侵袭过程[3-4]。目前MMP在恶性肿瘤侵袭转移方面的研究多有报道，而在白斑及上皮不同增生程度间表达的研究较少。本文应用免疫组织化学方法检测MMP-2、MMP-9在正常口腔黏膜、白斑上皮单纯性增生和异常增生中的表达情况，以期对两者在白斑发生发展中的变化做初步的研究。 　　1 材料与方法 　　1.1 病例来源及选择标准 本实验选取的标本均为2008-2014年间大连市口腔医院颌面外科的手术标本，所有患者均知情同意。其中正常组15例为黏液囊肿活检标本中的正常口腔上皮组织。由2位高年资病理医生重新复核切片将白斑分为两组：白斑上皮单纯增生组31例和白斑上皮异常增生组35例。所有标本均经10%中性福尔马林固定，取材后脱水制成石蜡，常规HE染色。实验均设阳性对照和阴性对照，血管内皮细胞的阳性表达可作为内对照参考[2]。 　　1.2 临床病理特征 白斑上皮单纯性增生31例，其中男19例，女12例，白斑上皮异常增生35例，其中男18例，女17例，见表1。 　　表1 白斑上皮单纯性增生和白斑上皮异常增生的发生部位 　　部位 白斑上皮单纯性增生 例（%） 白斑上皮异常增生 　　轻度（例） 中度（例） 重度（例） 合计 　　例（%） 　　舌背及舌缘 11（35.48） 3 4 3 10（28.57） 　　磨牙后 2（6.45） 0 2 3 5（14.29） 　　颊部 10（32.26） 4 2 1 7（20.00） 　　牙龈 3（9.68） 1 0 0 1（2.86） 　　舌腹 1（3.23） 1 3 3 7（20.00） 　　唇 2（6.45） 1 0 0 1（2.86） 　　腭部 2（6.45） 3 1 0 4（11.43） 　　合计 31（100） 13 12 10 35（100） 　　1.3 主要试剂及方法 兔抗人MMP-2多克隆抗体（即用型），兔抗人MMP-9单克隆抗体（1：100），均由北京中杉金桥公司购得。采用免疫组化SP染色法。 　　1.4 结果判定 MMP-2和MMP-9均以胞浆呈棕褐色为阳性。根据综合染色强度和阳性细胞占总细胞数的百分比进行评价[5]：由两人双盲法观察切片，染色阴性0分，染色弱1分，染色清晰2分，染色强3分；阳性细胞数50%为4分。两项之和≥4为阳性表达。 　　1.5 统计学处理 MMP-2和MMP-9的免疫组化结果和各自病理间的关系应用SPSS 12.0软件进行 字2检验，以P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 MMP-2阳性表达在上皮细胞的胞浆中，主要分布于基底细胞层中，也可见棘细胞层中。三组阳性率表达情况见表2，三组比较差异无统计学意义（P0.05）。此外，在上皮下结缔组织中也发现了MMP-2的表达，以成纤维细胞表达居多，也可见炎细胞及血管内皮细胞中，成纤维细胞的阳性表达率见表3，三组比较差异无统计学意义（P0.05）。 　　2.2 MMP-9阳性表达位于上皮细胞的胞浆中，多见于棘细胞层中。三组的阳性表达率见表4，其中白斑异常增生组较正常组和单纯增生组比较差异有统计学意义（P0.05）。在上皮