VHL蛋白及HIF―1α蛋白在结直肠癌中表达及其相关性研究.docVIP

VHL蛋白及HIF―1α蛋白在结直肠癌中表达及其相关性研究 　　【摘要】 目的：探讨结直肠癌中VHL（von Hippel―Lindau）蛋白的表达与HIF-1α蛋白表达的意义，并分析两者的相关性。方法：应用免疫组化Envisin二步法检测58例结直肠癌及20例结直肠粘膜炎症组织中VHL及HIF-1α的表达。结果：（1）VHL在结直肠癌组织中的阳性率为46.55%（27例/58例），低于在结直肠粘膜炎症组织中的95%（19例/20例），差异有显著性（P0.05）；HIF-1α在结直肠癌组织中的阳性率分别为74.14%（43例/58例），高于其在结直肠炎症组织中的20%（4例/20例），差异有显著性（P0.05）。（2）结直肠癌中VHL与肿瘤淋巴结转移有关（P0.05）；HIF-1α与淋巴结转移有关 （P0.05）。（3）VHL与HIF-1α在结直肠癌组织中的表达存在相关性（x2=9.098，P0.05）。结论：VHL和HIF-1α参与了结直肠癌的发展和转移；在结直肠癌中，VHL的表达与HIF-1α的表达相关。 　　【关键词】 VHL；HIF-1α；结直肠癌；免疫组化 　　【中图分类号】R735.3+5 【文献标识码】B【文章编号】1005-0019（2013）12-0553-01 　　VHL （von Hippel―Lindau）基因是1993年被鉴定的肿瘤抑制基因，是在研究VHL综合征时发现的。VHL基因主要通过其编码的蛋白质pVHL发挥抑癌作用。pVHL的一个重要功能是与转录延长因子Elongin和 Cu12蛋白组成VEC （pVHI-ElonginC-ElonginB-Cul2）复合物（又称复合体CBCVHL），其已被证实属于E3-泛素蛋白酶系统，有介导蛋白降解的作用[1]。缺氧诱导因子HIF（hypoxia inducible factor）是已知由VEC复合物降解的最重要的蛋白，包括HIF-1，HIF-2和HIF-3，HIF-1α是HIF-1的功能基团。本文通过免疫组化法检测pVHL和HIF-1α蛋白在结直肠癌和结直肠炎症组织的表达，探讨其在结直肠癌发生发展中的作用及它们之间的相互关系。 　　材料与方法 　　1.1研究材料 收集贵阳医学院附属医院1994年1月―1998年12月间结直肠癌手术标本共计348例，选取其中具有完整临床及随访资料并且术前均未经化疗和放疗的同一组织学类型（管状腺癌Ⅱ级）及治疗方法相同的病例58例。同时收集同期结直肠粘膜炎症标本20例做对照。 　　1.2主要试剂 浓缩型鼠抗人单克隆抗体VHL购自迈新生物有限公司，兔抗人多克隆抗体HIF-1α购自博士德生物有限公司，为工作液。SuperPicTure通用型试剂盒购自广州深达生物有限公司，DAB显色剂购自北京中杉生物有限公司。 　　1.3 方法： 　　1.3.1 标本处理与常规HE染色，按常用病理技术操作规范进行。 　　1.3.2免疫组织化学染色：采用Envision法。VHL抗体工作浓度1：75。操作按说明书进行。用PBS代替一抗做空白对照。 　　1.3.3 结果判定：免疫组化结果以胞浆内出现浅黄色至棕褐色颗粒为阳性细胞标志与大多数细胞染色特征决定。 　　1.3.4 统计学方法：运用SPSS16.0统计软件数据包进行数据处理，采用x2检验和 x2关联性分析。 　　2 结果 　　2.1 免疫组化结果 　　2.1.1 VHL的表达 　　VHL蛋白主要表达于细胞浆，阳性染色细胞呈棕黄色颗粒或团块。VHL蛋白在癌组织及直肠黏膜慢性炎症组织中都能检测到（图1、图2）。20例慢性炎症组织中阳性率为95%（19/20），而在结直肠癌组织中为46.55%（27/58），可见，VHL在结直肠癌组中的表达明显低于炎症组，两者比较差异有显著性（P0.05）。见表1。VHL的表达与年龄、浸润深度及五年生存率无关，与癌组织有否淋巴结转移有关（P0.05）。见表2。 　　图1：结直肠癌中VHL呈阳性表达 Envision法 X200 图2：结直肠黏膜慢性炎症组织中VHL呈阳性表达 Envision法 X200 　　2.1.2 HIF-1α的表达 　　HIF-1α主要表达于细胞浆，阳性染色细胞呈棕黄色颗粒或团块。HIF-1α蛋白在癌组织及直肠黏膜慢性炎症组织中都能检测到（图3、图4）。58例结直肠癌标本中有43例阳性，阳性率为74.14%。20例对照中4例阳性（20%）。HIF-1α在结直肠癌中的表达明显高于结直肠炎症组织，两者间有显著性差异（P0.05），见表1。HIF-1α的表达与年龄、浸润深度及五年生存率无关，与癌组织有否淋巴结转移有关（P0.05）。见表2。 　　图3：结直肠癌中HIF-1α呈阳性表达 Envision法 X20