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ISSR标记在芋遗传多样性研究中应用前景 　　摘 要：ISSR是在SSR基础上发展起来的一种分子标记技术，兼具SSR、RAPD、RFLP、AFLP等分子标记的优点。对运用形态学和分子生物学手段研究芋的遗传多样性进展进行了综述，并对ISSR分子标记技术在芋种质资源遗传多样性和亲缘关系、种质资源鉴定和指纹图谱构建、基因定位和分子标记辅助选择等方面的应用前景做出了分析和展望。 　　关键词：芋；ISSR；分子标记；遗传多样性 　　 　　 芋 [Colocasia esculenta （L.） Schott]又名芋艿、芋头，是天南星科多年生草本植物，原产于中国、印度和马来半岛等热带沼泽地。芋作为一种具有地域特色的水生蔬菜，在全世界广泛栽培[1]，其球茎富含淀粉及蛋白质，不仅可作为蔬菜食用，而且在很多国家或地区还被作为主食。此外，芋也是酿制酒精的原料。芋耐运输和贮藏，能解决蔬菜周年均衡供应的问题，并可作为外贸出口商品。相对其他作物而言，芋的相关研究尤其品种资源、遗传进化方面研究一直未受到世界各国的重视。 　　1 芋遗传多样性研究现状 　　1.1 芋种质资源的形态学研究 　　 我国作为芋的起源中心之一，拥有丰富的芋种质资源，但我国在芋种质资源方面的研究相对滞后，对芋种质资源遗传多样性研究较少。目前主要的研究多停留在芋形态学的观察，其中最为复杂和最有争议的为芋的分类问题。由于芋的品种资源丰富，表型性状相对比较复杂，任意一种表型特征都可以作为分类的依据，如叶柄的颜色、球茎芽色、球茎肉质颜色、叶尖、叶基、叶形、地下茎形态、开花及花序、熟性以及水旱适应性等，因此分类时所依据的形态特征不同，分类方法也不尽相同。吴征镒等[2]依据母芋与子芋的发达程度及子芋习性将芋分为多子芋、魁芋和多头芋3类；张志[3]将芋分为叶柄变种和球茎变种，其中球茎变种又划分为魁芋、多子芋和多头芋3种类型；张谷曼等[4]根据芋的分蘖习性、染色体数目及地理分布，将芋分为4类：魁芋类（2n=2x=28）、魁子兼用类（2n=3x=42）、多子芋类（2n=3x=42）及多头芋[2n=2x（3x）=28（42）]；魏文麟等[5]又将芋分为叶用芋变种、花用芋变种和球茎变种3类，每个类型再根据叶柄和芋的颜色分为若干副型。由此可见，芋的分类存在容易混淆和方向模糊的问题。由于对芋的分类大多根据其形态特征，故反映不出研究材料本质上的差异。另外，分类标准不统一，分类手段的局限，导致分类结果不一致。部分品种来源不清，品种亲缘关系不明，同物异名及同名异物等现象十分普遍，不利于芋种质资源的研究和品种的选育和推广，也给种质资源的保存、评价、创新、利用带来极大的不便。 　　 20世纪90年代后期发展起来的DNA指纹图谱（DNA fingerprinting）技术具有多态性丰富、分辨率高、稳定性强等优点，目前已成为一种非常重要的研究种质资源的技术手段。该技术可以用来对种质资源进行评估以及对品种真实性和纯度进行鉴定。因而深入利用现代生物技术，从DNA水平上进行芋种质资源的遗传多样性分类研究显得尤为 　　重要。 　　1.2 国内外芋遗传多样性的分子生物学研究进展 　　 20世纪末，国内外已开展关于芋资源的遗传多样性的分子标记研究。1991年Lebot等[6]就用同工酶对1个南亚的芋种质资源库和1个美拉尼西亚的芋种质资源库进行了分析，揭示了2种芋资源的进化历程可能不同。Irwin等[7]1998年利用RAPD分子标记对44份芋种芋资源进行了遗传多样性分析，将印度尼西亚的芋种质资源与夏威夷的芋种质资源区别开来，同时也把二倍体和三倍体芋资源区别开来。2003年，Kreike等[8]采用AFLP标记技术对东南亚地区和太平洋地区（包括越南、泰国、马来西亚、印度尼西亚、菲律宾、巴布亚新几内亚和瓦努阿图）的255个芋种进行了遗传背景和多样性的分析，研究结果显示相同国家或地域的芋种质资源的遗传相似性较高。Kreike等发现255个材料可以分为2大类，一类是亚洲国家的芋种质资源，另一类是太平洋地区的芋种质资源，但是泰国地区的的芋种质资源却划入太平洋地区。2004年Quero-Garcia等[9]利用AFLP技术辅助分析了瓦努阿图的450个芋样本，与育种者常用的农艺性状分类方法的结果相比较，证实了分子标记分析技术是对芋种质进行分类并指导其育种工作行之有效的方法。而用SSR标记对芋进行分析却受SSR引物的开发和数量的限制。2007年Mace等[10，11]利用7对SSR引物对巴布亚新几内亚的859个芋种质资源进行聚类分析，并与其农艺性状分类法的结果相比较，以保护当地的芋种质资源。 　　 相对于国外而言，国内在芋种质资源保存和芋种质资源遗传多样性方面的研究比较零散。据报道，福建农学院收集了177份芋种质资源，中国科