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MicroRNA及其在黑素瘤中作用新认识 　　【摘要】 MicroRNA（miRNA）是一类长约18～22个核苷酸的单链非编码小分子。在转录后水平参与调控靶基因的表达，其在细胞生长、增殖、代谢及肿瘤形成等一系列生物学过程中发挥重要作用。miRNA具有癌基因和/或抑癌基因的双重作用并具有组织特异性和时序特异性。miRNA的异常表达被认为与黑素瘤的发生发展密切相关。黑素瘤是严重危害患者健康和生命的疾病，其病死率高，晚期患者5年生存率5%，预后差。近几年来，其发病率逐年升高，年增长率约3%。本文试就miRNA的生物学特性及其在黑素瘤中作用的新进展、新认识作一综述。 　　【关键词】 MiRNA； 生物学特征； 肿瘤生成与作用机制； 黑素瘤 　　黑素瘤（melanoma）又称恶性黑素瘤（malignant melanoma，简称恶黑）是最具侵袭性的一种高度恶性、易远处转移的皮肤肿瘤[1]，起源于黑素细胞，多发生于皮肤，亦可见于皮肤黏膜交界处、眼球脉络膜和软脑膜等处，死亡率高。早期恶黑以手术治疗为主，预后较好，晚期转移性恶黑因对放疗，化疗及生物治疗均不甚敏感，其中位生存期6～9个月，5年生存率5%[2]，预后差。近几年来，其发病率逐年升高，年增长率约3%[3]。MicroRNA（miRNA）是一类长约18～22个核苷酸（nt）的非编码单链小分子RNA，参与生物体一系列生物学过程，在细胞生成、繁殖、代谢、凋亡和肿瘤生成等方面广泛、精确地调控靶基因并影响其表达。miRNA在人体最大的器官——皮肤中也起着重要作用[4]。miRNA的异常表达，被认为与恶黑的发生、发展等密切相关。Worly等[5]在研究葡萄膜恶黑中认为，miRNA的表达有可能成为预测其转移风险的生物学指标。 　　1 miRNA的生物学特征及其生成与作用机制 　　近年来，miRNA已成为生命科学研究的热点，自1993年在果蝇中发现第一个miRNA以来，迄今已有15 172个miRNA相继在脊椎动物、蠕虫、果蝇、植物和病毒等142个物种被发现，通过克隆技术（cloning technology）、深度测序（deep sequencing） 以及复杂的生物信息学和遗传筛选等方法，发现并鉴定人类基因组织中可能存在约1000个miRNA，调节人类近30%基因表达。约有超过50%的miRNA定位于肿瘤相关的脆性位点（fragile site）[6-7]。参与生命过程中一系列重要进程，包括发育、繁殖、分化和凋亡等。 　　1.1 miRNA的生物学特征 （1）是一组内源性非编码，长度为18～22 nt的单链小分子，广泛存在于动、植物及病毒等的真核细胞中，具有高度保守性，其本身不具有开放阅读框架。（2）结构上，miRNA为单链结构，在3’端有1～2个碱基的长度变化，5’端有一磷酸基团，3’端为羟基，该结构所具有的特点使其与功能RNA的降解片段和大多数寡核苷酸保特区别。（3）miRNA具有较强的同源性，来自不同基因簇的RNA同源性较弱，其表达具有组织特异性和时序特异性[7]。 　　1.2 miRNA的生成及作用机制 MiRNA的生成过程包括转录、加工成熟及功能复合体装配等主要程序。近期研究表明，miRNA的生成和作用大致经历两个阶段[8]，即RNA聚合酶2作用于miRNA基因，转录生成初级miRNA（pri-miRNA），再由RNA聚合酶3-Dorsha-DGCR8复合体切割形成前体miRNA（pri-miRNA），在细胞内完成；聚合酶3、旋解酶及核酸酶Dicer（属于Rnase3家族）共同作用于pre-miRNA，将其剪切为双链miRNA，随后双链miRNA被降解，一条5’端不稳定的链被结合到核蛋白复合体并参与形成由RNA诱导的沉默复合体（RNA-induced silencing compley， RLSC）[9]，另一条链随即被降解，进入RLSC的miRNA直接与Ago（Argonaute）家族的蛋白质结合，作为“向导”分子介导RLSC剪切靶基因mRNA使其降解或结合到靶基因mRNA的3，UTR（3’端非翻译区）翻译，从而在生物学过程中发挥多种功能[7]。 　　2 miRNA在肿瘤发生发展中的作用 　　miRNA通过靶基因3’UTR序列结合，以抑制翻译或降解miRNA的两种方式，在转录后水平调控基因表达，其与肿瘤的发生发展有着密切的关系。虽然大约逾半数的miRNA在基因组上定位于与肿瘤相关的脆性位点，但表观遗传学（epigenetics）的调控及miRNA的单核苷酸的多态性（SNP）均参与了肿瘤发生过程中miRNA的表达变化，亦是肿瘤发生发展的重要因素。研究表明，通过调控靶基因的表达，miRNA参与一系列生理病理过程，包括调节细胞自我更新、凋亡、干细胞分化和肿瘤的发生及转移