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α―硫辛酸对兔动脉粥样硬化斑块形成影响 　　[摘要]目的探讨α-硫辛酸（α-LA）对兔血管内皮损伤的保护作用及其对动脉粥样硬化（AS）斑块形成的影响。方法24只雄性日本大耳白兔分为造模组和α-LA组，每组12只。两组均以液氮冻伤术损伤血管内皮，术后均给予高脂饲料喂养。两组术后分别予以等量α-LA和0.9%氯化钠注射液皮下注射，隔日1次，连用4周。8周末光镜观察AS斑块形成情况，并检测血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）、内皮素1（ET-1）、一氧化氮（NO）表达变化。结果与造模组比较，治疗8周后，α-LA组AS斑块形成较小，胶原纤维含量也较少；而α-LA组血清SOD和NO水平显著升高（P0.01），MDA、ox-LDL、ET水平显著降低（P0.01），且α-LA组较造模组变化更为显著（P0.05）。结论α-LA具有防治AS斑块形成作用，其机制可能与α-LA能改善血管内皮氧化损伤有关。 　　[关键词]动脉粥样硬化；α-硫辛酸；血管内皮；氧化损伤 　　中图分类号：R543.5文献标识码：A文章编号：1009-816X（2016）03-0178-03 　　doi：10.3969/j.issn.1009-816x.2016.03.04 　　目前，心脑血管疾病是世界发病率最高的疾病之一，其致残、致死率也高居各类疾病之首[1]。其中，动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）斑块形成是导致心脑血管疾病的主要病理基础[2]。研究显示，氧化应激是导致血管内皮损伤的重要原因之一，被认为是AS斑块形成的中心环节[3]。因此，减轻机体氧化应激水平，改善血管内皮氧化损伤是防治心脑血管病的有效措施之一。目前，有关抗氧化剂α-硫辛酸（α-LA）对AS斑块形成影响的研究，在国内外尚未见文献报道。本研究通过液氮冻伤术损伤血管内皮制作兔斑块模型[4]，然后对斑块模型进行α-LA治疗，观察α-LA对血管内皮损伤的保护作用及其对AS斑块形成的影响，为临床应用α-LA防治心脑血管疾病提供理论依据。 　　1材料与方法 　　1.1材料：健康雄性日本大耳白兔24只，体重（1.8～2.2）kg，购自温州医科大学动物中心[许可证号：SCXK（浙）2006-0026]。α-硫辛酸注射液（150mg/支，批准文号：国药准字由重庆药友制药有限公司生产；超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）、内皮素1（ET-1）、一氧化氮（NO）试剂盒均购于南京建成生物有限公司。 　　1.2方法： 　　1.2.1液氮冻伤术损伤血管内皮：24只日本大耳白兔以普通饲料适应性喂养3d，分为造模组和α-LA组，每组12只，均采用液氮冻伤术损伤血管内皮。具体操作参照Fang等实验方法[4]：3%戊巴比妥钠（30mg/kg）麻醉，分离右颈总动脉，以血管夹暂时阻断血流，1ml注射器抽取0.9%氯化钠注射液冲洗管腔，抽空血管腔，再以1ml注射器抽取液氮快速注入右颈总动脉，反复3次以造成血管内皮损伤。两组术后均以高脂饲料（含1%胆固醇、3%大油、15%蛋黄和81%普通饲料）喂养8周。 　　1.2.2治疗方法：α-LA组以α-LA（5mg/kg）皮下注射，造模组以等量0.9%氯化钠注射液代替α-LA皮下注射，均隔日1次，连用4周。 　　1.2.3血液标本留取及检测：两组治疗8周后，分别抽取兔耳缘静脉血2ml，离心分离血清，保存于-70℃低温冰箱待测。硫代巴比妥酸比色法（TBA）测定血清MDA水平，羟胺法测定血清SOD水平，硝酸还原酶法检测血清NO，放射免疫法检测ET-1水平，酶联免疫吸附法（ELISA法）检测血清ox-LDL水平。具体操作步骤按试剂盒说明书进行。 　　1.2.4动脉粥样硬化（AS）斑块形成的鉴定：8周末采血后以过量戊巴比妥钠处死兔，取出右颈总动脉标本，0.9%氯化钠注射液冲洗，4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，血管横截面连续切片（4μm），分别以HE染色和Masson三色染色，光镜观察AS斑块形态和结构。 　　1.3统计学处理：采用SPSS19.0软件进行数据处理。计量资料以（x-±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，组内比较以两因素方差分析，P0.05为差异有统计学意义。 　　2结果 　　2.1AS斑块形态和结构：HE染色后，造模组光镜下可见内膜平滑肌细胞增生明显，形成典型的AS斑块，斑块内可见较大的脂质池和大量泡沫细胞，血管管腔明显狭窄（图1a）；α-LA组血管内膜中层平滑肌细胞增生，内膜下少量脂质沉积，早期脂纹期改变，形成较小AS斑块（图1b）。 　　Masson三色染色后，两组血管中膜不同程度增厚，可见蓝色的胶原纤维、红色的肌纤维和纤维素及蓝黑色的细胞核，