miRNA―181a及其靶基因共济失调―毛细血管扩张突变基因在胃癌组织中表达研究.docVIP

miRNA―181a及其靶基因共济失调―毛细血管扩张突变基因在胃癌组织中表达研究 　　【摘要】[目的]：分析miRNA-181a及其靶基因共济失调-毛细血管扩张突变基因在胃癌组织中的表达结果。[方法]：选取我院2014年～2015年收治的外科手术切除胃癌组织标本10例作为研究对象，设为实验组；同时选取癌旁肺癌组织10例作为对照组。分析胃癌组织中miRNA-18la和靶基因共济失调-毛细血管扩张突变基因蛋白表达的相关性。提取蛋白质和总RNA，采取荧光定量PCR检验标本中的miRNA-18la，采用Western blot检验靶基因共济失调-毛细血管扩张突变基因蛋白。对比两组患者miRNA-18la和靶基因共济失调-毛细血管扩张突变基因蛋白的表达量。[结果]：miRNA-18la在实验组中的表达量为（1.998±1.912），在对照组中的表达量为（0.493±和0.098），实验组中的靶基因共济失调-毛细血管扩张突变基因蛋白表达量为（0.2565±0.00876），在对照组中的表达量为（0.5535±0.0453），两组患者在miRNA-18la和靶基因共济失调-毛细血管扩张突变基因蛋白的表达量具有明显差异，P〈0.05表示统计学有意义。miRNA-18la和靶基因共济失调-毛细血管扩张突变基因蛋白的表达呈现正相关联系。[结论]：miRNA-18la在实验组中明显升高，靶基因共济失调-毛细血管扩张突变基因蛋白在实验组中表达量明显降低，影响原因大概是基因沉默机制miRNA-18la降低了靶基因共济失调-毛细血管扩张突变基因蛋白的表达量，在胃癌疾病发生发展中起到了促进作用。 　　【关键词】miRNA-18la；靶基因共济失调-毛细血管扩张突变基因蛋白；胃癌组织 　　临床发现，胃癌发病率和死亡率高，疾病早期的诊断率及手术切除率成功率较低，患者5年生存率仅有40%左右。胃癌疾病具有很多影响因素，例如p53、p21、NFκB、COX2、PTEN、RUNX3、ATM和KLF6等。为了能够了解胃癌发生、发展的相关基因资料以及胃癌的分子遗传学机制，提供胃癌诊断和治疗基础的理论依据成为临床上重点研究的内容[1]。miRNAs参与了调节细胞的增殖、分化、凋亡以及迁移等生物学过程，在细胞的发育和表型确定中发挥了重要的作用，miRNA在肿瘤中的异常表达、肿瘤的发生发展以及治疗预后密切相关。靶基因共济失调-毛细血管扩张突变基因是一种抑制癌变的基因，通过激活p53和p21等基因来激活G1 /S期检测点，并通过chk1、chk2和Cdc25家族成员来激活S期和G2/M期检测点。 　　1资料和方法 　　1.1一般资料 选取我院2014年～2015年收治的外科手术切除胃癌组织标本10例作为研究对象，设为实验组；同时选取癌旁肺癌组织10例作为对照组。实验组患者均确诊为胃癌晚期，患者在手术前没有采用化疗等治疗，对照组患者取距离胃癌病灶5厘米以上的组织作为研究，手术后通过液氮速冻后保存在零下八十摄氏度的冰箱中[2]。 　　1.2方法 本实验将用qRT-PCR分析miR-181a在胃癌细胞SGC-7901、MGC-803、BGC-823、MKN-28、AGS表达情况，结合细胞的增殖和分化特征，筛选合适的胃癌细胞株进行下一步实验；构建质粒miR-181a Inhibitor，使用miR-181a Inhibitor和阴性对照（质粒NC）转染胃癌SGC-7901细胞，通过相差显微镜观察以及MTS、流式细胞仪（FACS）、Transwell细胞迁移和细胞侵袭实验等技术和方法分析miR-181a对胃癌细胞的细胞周期、增殖与凋亡、迁移与侵袭等生物学行为的影响[3]；应用miRanda、Pictar和Targetscan等生物信息学方法对miR-181a靶基因进行预测，双萤光素酶报告系统验证miR-181a的靶基因（ATM）；qRT-PCR检测HEK293T细胞中ATM mRNA的变化；Western Blot检测HEK293T细胞中ATM蛋白的变化；研究胃癌和非癌组织表达的miR-181a和靶基因ATM蛋白表达的相关性[4]。 　　1.3统计学方法[5] 采用SPSS13.0软件进行研究，计量资料采用t检验，采用%表示，计数资料采用X2检验，采用（x±s）表示，P〈0.05表示统计学有意义。 　　2结果 　　miRNA-18la在实验组中的表达量为（1.998±1.912），在对照组中的表达量为（0.493±和0.098），实验组中的靶基因共济失调-毛细血管扩张突变基因蛋白表达量为（0.2565±0.00876），在对照组中的表达量为（0.5535±0.0453），两组患者在miRNA-18la和靶基因共济失调-毛细血管扩张突变基因蛋白的表达量具有明显差异，P〈