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H2O2对盐胁迫下羽衣甘蓝幼苗生长影响 　　摘要： 以羽衣甘蓝名古屋品种（Brassica oleracea L. var. acephala f. tricolor Hort.）为研究材料，在100 mmol/L NaCl胁迫下，分别使用外源H2O2和H2O2清除剂二甲基硫脲处理。2 d后测定植物的生长速率、干质量、鲜质量和相对含水量，6 h后测定植株体内3个抗氧化酶超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、抗坏血酸过氧化物酶（APX）的活性及基因的表达。结果显示，盐胁迫下加入0.05 mmol/L外源H2O2，羽衣甘蓝幼苗生长速率、干质量、鲜质量、相对含水量、3个抗氧化防护酶的活性和基因表达分别高于盐胁迫下相关指标；清除内源H2O2，则植物幼苗生长速率、干质量、鲜质量和相对含水量、3个抗氧化防护酶的活性及基因表达分别低于盐胁迫下相关指标。由此推测，在盐胁迫条件下，H2O2参与了抗氧化防护基因表达的调控，它可能是盐胁迫诱导的羽衣甘蓝叶片抗氧化防护系统的重要调控因子。 　　关键词： 羽衣甘蓝；H2O2；盐胁迫；抗氧化酶；基因表达 　　中图分类号： S635.901 文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2017）22-0149-04 　　盐胁迫是造成作物严重减产最常见的逆境条件，提高植物对环境胁迫的抗性，尤其是对盐胁迫的抗性，是稳定植物生长的首选目标，当植物受到环境胁迫时会产生大量活性氧，包括过氧化（H2O2）、单线态氧（1O2）、羟自由基（?OH）、超氧阴离子（O-2[KG-*2]? ）、脂质过氧基（ROO?）等[1-4]。盐胁迫能迅速诱导植物体内活性氧的积累，对蛋白质和脂类引起氧化损伤[5]。而植物体内有2种清除保护机制，即酶促系统和非酶促系统，其中酶促系统包括超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和抗坏血酸过氧化物酶（APX）等。研究表明，盐胁迫能使植物体内活性氧增高[6-8]。近年来，许多试验表明，H2O2是一种重要的信号分子，当植物细胞在响应于各种胁迫反应时能生成该物质，并进一步调节应激反应的一系列信号转导[9-14]。有证据显示，逆境条件下内源H2O2积累能增加植物的抗逆性，过量的H2O2等ROS能引起细胞内大分子氧化损伤；Wahid等的研究表明，过氧化氢预处理可以使细胞膜系统保持完整，继而提高小麦种子抗氧化能力，增强小麦在萌发过程中的耐盐性[13]。在植物的抗盐反应中起到关键作用的SOS1（salt overly sensitive）是拟南芥Na+/H+反向转运体，H2O2能调节其mRNA稳定性。然而，在盐胁迫诱导下，H2O2与氧化酶活性其表达机理尚不十分清楚。 　　本试验研究盐胁迫下外源H2O2或者清除体内H2O2对羽衣甘蓝幼苗生长特性、抗氧化酶活性及相关基因表达的影响，旨在揭示H2O2在植物抗盐胁迫反应中的作用机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　试验于2015年8―10月在黄淮学院实验室进行。选用羽衣甘蓝名古屋品种（Brassica oleracea L. var acephala f. tricolor Hort.） 为研究材料，由驻马店市南海公园提供。H2O2供体为30% H2O2，H2O2清除剂为二甲基硫脲，均为国产分析纯。 　　1.2 试验处理 　　把羽衣甘蓝种子，消毒后，用蒸馏水冲洗数次，滤纸吸干。处理后的种子放入垫好滤纸的培养皿中，温室培养[温度：（24±2） ℃，光照―黑暗：16 h―8 h，光照度：2 000 lx]。待羽衣甘蓝胚根长3～5 mm时，选取胚根整齐一致的幼苗，盆栽。待苗长至10 cm左右，放入Hoagland溶液温室预培养3 d。3 d 后，分4组进行处理，分别是对照组（CK）：Hoagland溶液；盐处理组（N）：100 mmol/L NaCl+Hoagland溶液；NaCl+H2O2组（N+H）：100 mmol/L NaCl+0.05 mmol/L H2O2+Hoagland溶液；NaCl+DMTU组（N+DMTU）：100 mmol/L NaCl+5 mmol/L DMTU+Hoagland溶液。处理6 h后，进行SOD、CAT、APX活性分析与基因（SOD，GenBank：JQ321587.1；CAT，GenBank：JF720325.1；APX，GenBank：XM_013733887.1）表达测定。用异硫酸胍法提取叶片内总RNA，ABI7700进行定量PCR，以actin（GenBank登录号AF111812.1）作为内参（表1），方法参照文献[15]进行。每处理重复3次，为了保持处理一致性，处理期?g每天更换处理液，处理48 h后，分别取羽衣甘蓝幼苗测定生长速率，取叶片分别测定干质量、鲜质量和相