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S100―A8在乳腺癌表达病理学研究 　　摘要：目的：分析S100-A8在乳腺癌表达及与乳腺癌临床病理和生存状况的关系。方法：用免疫组织化学方法检测S100-A8蛋白在乳腺良性疾病（n=15）及乳腺癌无淋巴结转移组（n=83）及109例有腋窝淋巴结转移乳腺癌和配对淋巴结转移灶中的表达，进行Kaplan-Meier生存分析和Cox回归分析。结果：S100-A8蛋白在乳腺癌原发灶和淋巴结转移灶之间存在差异表达，原发癌组织和配对的转移性淋巴结之间差异有统计学意义。Kaplan-Meier生存分析和Cox回归模型提示组织学分级和淋巴结状态是乳腺癌的危险因素。结论：S100-A8蛋白与乳腺癌淋巴结转移相关，并与ER表达水平和组织学类型有关。 　　关键词：乳腺癌；S100-A8；淋巴结转移；免疫组化方法 　　中图分类号：R737.9 文献标志码：A 文章编号：1008-2409（2016）05-0036-04 　　乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤和女性癌症死亡的第二大原因。乳腺癌在西方??家发病率和病死率高，而其发病率在发展中国家呈上升趋势。S100家族蛋白是脊椎动物特有的分子量为10～20 kDa的小酸性蛋白质，可以与钙离子以同型二聚体或低聚物形式结合。许多研究已经描述了这些蛋白质与炎症和癌症的关系。至少有16个编码S100家族成员的基因，包括S100-A8基因，聚集在人类染色体lq21，在肿瘤的发生发展中这个区域经常出现染色体重排，并与肿瘤细胞的增殖和转移相关。笔者对S100-A8在乳腺癌中的表达及临床病理学意义进行了初步研究。现报告如下。 　　1资料与方法 　　1.1病例资料 　　选择1996年5月至2008年5月在湖南省肿瘤医院就诊207例女性乳腺疾病患者的石蜡组织样本。其中15例诊断为乳腺良性疾病包括乳腺纤维囊性改变、不典型增生和纤维腺瘤，83例诊断为无区域淋巴结转移乳腺癌，109例有腋窝淋巴结转移乳腺癌和配对淋巴结转移灶。所有乳腺癌患者均经湖南省肿瘤医院病理确诊，术前均未接受放疗或化疗。原发性肿瘤患者的平均年龄为45岁（30～73岁），平均总生存时间约为80.07个月。组织标本用10%甲醛固定液，石蜡包埋，4μm厚切片。所有病理切片均由湖南肿瘤医院病理科两位有经验的病理医生观察，均为浸润性导管癌和浸润性小叶癌。分为4组检测S100-A8蛋白的表达：①乳腺良性疾病（BBD）。②无淋巴结转移的乳腺癌原发灶（NMBT）。③有淋巴结转移的乳腺癌原发灶（PBT）。④配对的淋巴结转移灶（PMLN）。 　　1.2试剂 　　兔单克隆免疫球蛋白（IgG）抗体S100-A8购自Abcam公司（英国）。柠檬酸抗原修复液（粉）（0.01M，pH：6，mvs-0066），0.01M PBS（pH：7.2～7.4）。DAB显色试剂盒（聚合物kit-0015）和ElivisionTMplus Polyer HRP试剂盒（大鼠和家兔）kit-9902（迈新生物技术产品，福建）。家用微波炉（格兰仕）对微波抗原修复。 　　1.3免疫组化方法 　　石蜡切片在烤箱烤60℃ 2 h，然后依次在二甲苯中脱蜡、梯度乙醇洗涤、流水清洗，柠檬酸抗原修复液中微波修复20 min。3%过氧化氢孵育15 min，非免疫血清封闭。滴加S100-A8抗体（1：200）4℃过夜。孵育链霉亲和素一过氧化物酶15 min，然后过氧化物酶标记二抗孵育15 min后，DAB显色。 　　1.4免疫组化染色结果评分 　　免疫组化染色结果判断由两位高年资病理医生进行，将结果进行比对，对不一致的结果将重验并达到一致。总的免疫组化染色评分（total immuno-staining score，TIS）综合染色比例和强度进行。 　　1.5统计学分析 　　应用Wilcoson signed-rank检验和MeNemar检验分析S100-A8各组乳腺病变中的表达差异。使用X2检验分析S100-A8表达与临床病理指标间的关系。Kaplan-Meier法分析S100-A8阳性和阴性乳腺癌患者的生存状态，Multivariat Cox风险分析$100-A8在乳腺癌预后中的作用。P0.05为差异有统计学意义。 　　2结果 　　2.1 S100-A8在各组乳腺病变组织中表达 　　免疫组化结果显示S100-A8阳性着色位于细胞质。阳性表达率在BBD、NMBT、PBT、PMLN分别为13.3%（2/15）、37.3%（31/83）、34.9%（38/109）、18.3%（20/109）。NMBT、PBT阳性表达率均明显高于PMLN、BBD（P0.01），BBD和PMLN，NMBT和PBT之间差异无统计学意义。详见图1～2。 　　2.2 S100-A8蛋白表达与临床病理特征之间的相关性