Cd2对淡水底栖硅藻Nitzschiaamplectens生长影响.docVIP

Cd2对淡水底栖硅藻Nitzschiaamplectens生长影响 　　摘要：对不同浓度Cd2+中淡水底栖硅藻Nitzschia amplectens的存活数、叶绿素a含量及运动速度进行测定，以探索硅藻对重金属毒性的响应规律，为硅藻监测水体污染提供科学依据。纯化培养Nitzschia amplectens，生长数量达到7万个/mL时，加入不同浓度的Cd2+进行急性毒性和亚急性毒性胁迫培养。在急性毒性试验中，Nitzschia amplectens的存活数在96 h的EC50值为4.989 mg/L。在亚急性毒性试验中，培养15 d后Cd2+浓度为0.625、0 mg/L的Nitzschia amplectens运动平均速度为2.5、5.56 μm/s，其余试验组无运动迹象；培养13 d后，Cd2+浓度与叶绿素a含量呈负相关（P0.05）。Cd2+浓度对Nitzschia amplectens的生长、运动速度和叶绿素a含量有明显影响，所以Nitzschia amplectens具监测水体重金属Cd2+污染潜力。 　　关键词：Nitzschia amplectens；重金属Cd2+；培养；生长；运动；叶绿素a；水质监测；指示生物 　　中图分类号： Q945.78；X832 文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2015）03-0305-03 　　镉是一种生物毒性很强的重金属，能在有机体内积蓄，通过食物链传递富集可引起生物体生长缓慢甚至死亡[1]。随着工业的发展，大量的Cd2+向环境中排放，使得环境中的Cd2+污染加重。中国水体镉污染时有发生，2012年1月15日广西龙江河宜州拉浪段发现重金属镉超标，至1月21日18时污染事件已造成约28.1万尾鱼死亡。目前镉已被美国毒理管理委员会（ATSDR）列为第6位危及人体健康的有毒物质，被联合国组织确定为优先检测的环境污染物[2]。 　　底栖硅藻是一种单细胞生物，分布很广，是水体中的初级生产者，在光合作用下它们吸收水中的无机盐和二氧化碳，制造有机物[3-4]，它们对净化水质具有重要意义。2000年欧共体水框架指南（Water Framework Directive of the European Union）推荐硅藻为水体监测生物指标。底栖硅藻对许多环境变量（pH值、光、盐度、温度、无机营养浓度等）敏感[5-6]，它们与水体重金属关系的研究已有一些报道。Nitzschia amplectens Hustedt是中国西南地区河流中常见淡水底栖硅藻，其与重金属关系的系统研究报道甚少。探索Nitzschia amplectens与Cd2+的关系，可为生物监测水质增加新的内容。 　　1 材料与方法 　　1.1 藻种 　　藻种Nitzschia amplectens Hustedt采集于贵州省乌江上游毕节市七星关区层台镇玉龙乡河流中段。 　　1.2 仪器设备 　　主要仪器有显微镜（NIKON EOLIPSE 50i）、生化培养箱（SPX-250）、水浴锅、超净工作台、离心机和微量移液器等。 　　1.3 底栖硅藻自制培养基 　　1.3.1 培养基基础液 培养基基础液配制见表1。 　　1.3.2 土壤浸出液配制 称取500 g土壤（土壤采集于贵州省贵阳市相宝山地区），去离子水1 L，混合后用塑料薄膜封口，沸水浴加热1 h，冷却，离心，过滤，取上清液，加蒸馏水至总体积1 000 mL，置于10.1 MPa高温下灭菌30 min，保存于 4 ℃ 备用。 　　1.3.3 Nitzschia amplectens培养基 将配制好的培养基基础液与土壤浸出液以一定的比例混合，用NaOH液将pH值调至7.5±0.5，经0.2 μm滤膜，灭菌，得到Nitzschia amplectens培养基。 　　1.4 纯化培养和胁迫培养 　　1.4.1 Nitzschia amplectens的分离及纯化培养 将野外采集的硅藻样品带回实验室，用50目的筛绢过滤水样，放于显微镜下观察，采用微吸管分离法，通过多次抓取，将Nitzschia amplectens藻种分离出来，即可将此放入自制培养基中在培养箱中培养。 　　培养条件：温度（24±1） ℃，光照周期12 h ∶12 h，光照度1 800 lx。每天12：00和19：00摇动藻液1 min，以防硅藻附在玻璃壁上。 　　1.4.2 Cd2+急性毒性胁迫培养 09：00―10：00在显微镜下用血球计数板统计藻密度，当藻种数量达到约7万个/mL时，用 500 mL 的培养瓶分装藻液，进行扩大培养，培养条件同“1.4.1”节。 　　取7个100 mL培养瓶（1个对照组+6个试验组），加入藻液40 mL，藻液密度为7万个/mL，再分