一类申报新药雷腾舒工作对照品核磁共振定量分析方法建立.docVIP

一类申报新药雷腾舒工作对照品核磁共振定量分析方法的建立 　　摘要 目的：建立一类申报新药雷腾舒工作对照品的核磁共振定量方法。方法：以咖啡因为内标，采用核磁共振定量法对雷腾舒样品进行定量。结果：本方法三个不同浓度水平的样品平均回收率为99.87%，RSD0.76%。重复性考察RSD为0.53%。日间精密度考察RSD为0.20%。结论：所建立的核磁共振定量方法，简便、快速、准确性、重复性好，可作为该新药工作对照品定量的方法之一。 　　关键词 核磁共振定量法 雷腾舒 工作对照品赋值 　　中图分类号：TQ460.72； 0657.2 　　文献标识码：A 　　文章编号：1006-1533（2016）01-0072-03 　　随着我国新药研究的发展，企业研发人员需要为开发的新药制备工作对照品并进行定量的情况越来越多。为确保定量的可靠性，往往需要用多种不同原理来建立定量方法。通过不同方法所测数据的差异，对工作对照品定量的准确性与可靠性进行确认。常用的方法丰要包括色谱扣除法（质量平衡法）和容量分析方法等，然而对于有些没什么滴定活性基团的化合物，往往很难找到合适的容量分析方法。 　　本研究为拟申报化学11类新药雷腾舒（研发代号T8，目前已在II期临床评价阶段，图1）药学研究中的一部分，按照新药研究指导原则，须采用不同原理的方法对其工作对照品进行定量（赋值）研究。在我们完成质量平衡法评估后，希望采用经典的容量分析方法进行比对研究。然而通过对本品结构、性质的深入分析，发现其结构中存在的3类可能的可滴定基团（环氧基、羟基、内酯环）都很难设计量化方案。分析如下。 　　①环氧基结构中存在的三个环氧结构单元，各自的化学环境不尽相同，难以量化反应程度。②羟基结构中有两个羟基，一个为二级羟基、另一个为三级羟基。二级羟基虽可通过与醋酐反应酰化后，用碱滴定牛成的醋酸，从而完成定量，但前提是须确保酰化完全。即使可以酰化完全，醋酐也很容易使三级羟基脱水，从而干扰定量结果。③内酯环该基团理论上可与碱反应，先加成再脱去-OR，但因本品内酯环上同时存在双键，会导致1、2加成与l、4加成同时存在，很难量化。预试验结果也证实了上述分析。 　　面对上述问题，如何选择更加便捷、可靠的赋值方法成为我们在新药申报中必须考虑的问题。通过调研，我们发现采用已知含量的其他化合物做内标的定量核磁方法可以很好地解决我们所面临的问题。方法具有专属性好、无需已知含量自身对照品的技术特点。 　　为了建立并验证该方法在新药一雷滕舒样品定量上的可行性，我们对该方法进行了研究，并获得了准确性、重复性良好的结果。 　　1 材料与方法 　　1.1 仪器 　　核磁共振仪（德国布鲁克，Ascend 400）。天平（瑞士梅特勒，XP56，百万分之一）。 　　1.2 试药 　　雷腾舒（本公司自制，批号：235-61；咖啡因（Alfa公司，含量99.6%）；氘代乙腈、氘代吡啶（JK Scientific Ltd.）；氘代二甲亚砜（Cambridge Isotope Laboratories. Inc.）。 　　1.3 样品制备与计算 　　精密称定咖啡因（约4mg）及本品（约6mg）适量至2ml量瓶，以氘代乙腈溶解并定容至刻度，摇匀，取约0.5ml到核磁管，上样测定。分别记录化学位移值为3.345、3.358组峰（T8）的面积和化学位移值为3.274峰（咖啡因）的峰面积，按下述公式计算。 　　A1/A2=n1W1/M1/（n2W2/M2） 　　其中A1为T8定量峰的面积、A2为内标咖啡因定量峰的面积； 　　n1为T8定量峰氢质子数（n1=1），n2为咖啡因定量峰氢质子数（n2=3）； 　　W1为T8测定量，W2为咖啡因称样量，M1、M2分别为T8、咖啡因的分子量。 　　1.4 核磁共振仪条件设置 　　核磁共振仪：2930序列，共振频率400兆赫，磁场强度9.4T，弛豫时间12s，中心频率3.31ppm。 　　2 结果 　　2.1 方法的重复性 　　采用本法对经干燥的T8样品（批号：235-61）平行测定5次，考察方法的重复性（表1）。结果表明，RSD小于2，方法重复性很好。 　　2.2 方法的重现性 　　为了考察方法的重现性，我们在不同日期，对上述T8样品进行了测定，经计算方法重现性好（表2）。 　　2.3 方法的准确度 　　采用上述方法，对方法准确度进行考察。取经干燥的T8原料（批号：235-61）4、6、8mg，精密称定，分别置于2ml量瓶中，再分别加入精密称定的4mg咖啡因，用氘代乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取0.5ml至核磁管中，测定。从平均回收率和RSD值可见该方法准确度非常好（表3）。 　　2.4 与质量平衡法数据的比较