一起猪牛急性死亡病例诊断与分析.docVIP

一起猪牛急性死亡病例的诊断与分析 　　中图分类号:S858.28;S858.23文献标识码:B文章编号:1007-273X(2010)01-0029-02 　　 　　黔西县林泉镇韦寨村3组有10户人家,从2003年4月到2009年7月共死亡耕牛24头,猪近20头。死亡耕牛多在4～10月发生,耕牛死前症状相似,且一般在较为封闭的圈内饲养。耕牛发病后,主要症状为不食草料、不愿走动、四肢无力、肌肉颤抖、口有白沫和神经症状等;多数耕牛发病后迅速倒地死亡,少数病例病程稍长,可达到12h;耕牛死后尸僵正常。同户饲养的猪也有死亡现象,主要表现为兴奋、不吃饲料、皮肤发红等,而家禽无异常现象。为查清死亡原因,我们对送检的猪血清样本12份、牛血清样本13份及相应血推片、1头病死牛脏器病料等样品进行了一系列化验,现将诊断情况介绍如下。 　　 　　 　　1病理剖检观察情况 　　 　　对1头发病死亡耕牛进行剖解病变观察,主要表现为:肝脏表面散布较多的坏死结节灶;肠内容为黑绿色,散发出恶臭味。 　　 　　2实验室诊断情况 　　 　　2.1送检猪牛血样的实验室检测 　　 　　(1)血推片染色镜检:将送检的猪血推片和牛血推片分别进行姬姆萨氏染色和瑞氏染色后,于光学显微镜下观察,未发现血液原虫。 　　(2)血清样本抗体检测:根据流行病学与临床症状特征,对送检猪血清样本主要进行了猪伪狂犬病(PR)和猪乙型脑炎(JE)抗体的检测。采用的试剂盒是猪伪狂犬病乳胶凝集试验(LAT)诊断试剂盒和猪乙型脑炎病毒ELISA抗体检测试剂盒,购自武汉科前生物技术有限公司;检测方法和结果判定按照试剂盒说明书进行。检测结果见表1。由表1可见,该自然村猪群存在不同程度的猪伪狂犬病和猪乙型脑炎感染,其感染抗体的阳性率分别达到25.0%和33.3%。 　　由于目前实验室没有检测牛伪狂犬病和乙型脑炎的抗体检测试剂盒,因此本次未对牛血清样本进行检测。 　　2.2送检牛组织病料的实验室诊断 　　 　　(1)肠黏膜寄生虫检查。取送检病死牛的肠黏膜进行触片,于光学显微镜(40×)下观察,可见到蛔虫和肝片吸虫等寄生虫的虫卵。 　　(2)送检脑组织病原检测。PCR检测:取送检牛脑组织,加入适量灭菌生理盐水,研磨成匀浆, 　　10 000r/min离心10min,收集上清液,采用SDS-蛋白酶K法提取DNA样本,以针对猪伪狂犬病病毒(PRV)gD基因引物进行PCR扩增,结果见图1。 　　动物接种试验:分别取牛脑组织匀浆液0.1mL和0.2mL,腹腔注射两只健康小白鼠。小白鼠于注射后呈现短暂的兴奋症状,但不久可恢复正常。 　　2.3细菌分离鉴定 　　(1)细菌分离培养。用接种环取送检牛肝、脾和肠内容物划线接种于鲜血琼脂平板,分别进行需氧和厌氧培养,24h培养后肝和肠内容物病料均能生长出三种不同的菌落:一是灰白色、圆形、湿润、边缘整齐、凸起、溶血的菌落,染色镜检为G+球菌;二是灰白色、湿润、边缘整齐、凸起、不完全溶血的菌落,染色镜检为G-球杆菌;三是白色、湿润、边缘整齐、凸起、完全溶血的菌落,染色镜检为G-小杆菌。 　　(2)细菌分离物鉴定。①G+球菌的鉴定:用煮沸法提取G+球菌分离物的DNA样本,分别以针对链球菌和葡萄球菌的特异性引物进行PCR扩增,结果未扩增出链球菌特异性DNA片段,但可见到葡萄球菌的特异性DNA片段,即可判定该G+球菌分离物为葡萄球菌。②G-球杆菌的鉴定:取G-球杆菌分离物接种麦康凯培养基,培养24h未见细菌生长;可发酵葡萄糖、麦芽糖和乳糖,不分解菊糖、鼠李糖和尿素,不产生靛基质和硫化氢,不液化明胶,能还原硝酸盐,结合菌体形态和培养特性,初步判定为溶血性巴氏杆菌。③G-小杆菌的鉴定:取G-小杆菌分离物接种麦康凯培养基,培养24h后可见生长出粉红色小菌落;生化试验结果显示,该分离菌在尿素、西蒙氏枸橼酸盐、硫化氢试验中均为阴性,而对氧化酶试验呈阴性;取该菌分离物与沙门氏菌属A-F多价血清进行玻片凝集试验,结果为阴性。综上所述,即可判定该G-小杆菌为大肠杆菌。 　　(3)细菌动物接种试验。取上述3种细菌的纯培养物各0.2mL,以腹腔注射法接种到健康小白鼠体内,24h后大肠杆菌组和葡萄球菌组小白鼠即可见明显的临床症状,如视觉模糊、精神不振、不愿走动、厌食等;36～48h后大肠杆菌组小白鼠发生死亡,并能从死亡鼠肺、肝和腹腔中分离到大肠杆菌,即可判定该细菌为致病性大肠杆菌。 　　连续观察5d,葡萄球菌组小白鼠虽有精神委顿等症状,但不发生死亡;而溶血性巴氏杆菌组小白鼠无明显的临床表现,也不发生死亡现象。 　　(4)细菌分离物药敏试验。取致病性大肠杆菌的纯培养物进行抗生素敏感性试验,结果见表2。 　　 　　3结果与分析 　　 　　(1)从