不同运动负荷对大鼠骨骼肌MyoD蛋白表达及卫星细胞影响.docVIP

不同运动负荷对大鼠骨骼肌MyoD蛋白表达及卫星细胞的影响 　　摘要：目的：探讨大鼠MyoD和卫星细胞（SC）在骨骼肌再生和修复过程中的表达和变化，以及不同负荷运动和云南白药干预在骨骼肌损伤和修复中的作用机制。方法：104只雄性wister大鼠随机分为安静对照组（S）、无负荷组（N）、中等负荷组（M）和大负荷组（H），然后将不同负荷组随机分成治疗（T）组和非治疗（n）组。建立大鼠损伤模型1d后，模型大鼠左侧后肢为治疗侧，右侧为非治疗侧，损伤后0、1、4、7、10d取大鼠后肢腓肠肌做HE染色，观察SC数量及形态学变化，用RT-PCR法测定损伤后骨骼肌MyoD表达。结果：骨骼肌形态学变化在损伤后0d、1d最严重；所有分组MyoD表达除MT、Mn组和NT、Nn组在10d时与S组比较无统计学差异，其它各组与S组比较均有非常显著性差异。MyoD表达在不同组别T组与n组中，HT组较Hn组在4、7、10d均显著降低，MT组较Mn组无统计学差异，NT组与Nn组比较只有在4d时显著降低；所有分组SC数量在4、7、10d时与S组比较均有显著增加。SC数量在不同组别T组与n组中，4d时不同负荷T组与n组比较有所增加，7、10d时不同负荷T组与n组比较显著增加（P0.01）。结论：云南白药在损伤过程中缩短炎症反应时间，加快了SC的激活与损伤修复，同时下调MyoD表达。MyoD和SC可以作为骨骼肌损伤后恢复程度的一个间接指标。 　　关键词：MyoD；卫星细胞；云南白药 　　中图分类号：G804； 　　文献标识码：A 　　文章编号：1008-2808（2015）04-0091-06 　　骨骼肌损伤是运动中最为常见的软组织损伤，在肌肉损伤中所占比例最大。骨骼肌损伤修复过程中肌肉质量和功能出现渐进性的下降，再损伤率上升，同时容易形成修复瘢痕，严重影响运动能力。不习惯的运动，特别是离心运动会导致肌节z盘加宽、模糊撕裂和肌节断裂等骨骼肌超微结构变化，这种变化也被称为运动性骨骼肌微损伤。骨骼肌卫星细胞激活数量与损伤修复密切相关，骨骼肌损伤后的再生和修复过程中的最重要的细胞是骨骼肌卫星细胞（satellite cell，SC）。SC和成肌调节因子（Myogenic Determinatio，MyoD）在骨骼肌的生长、发育、训练适应和损伤、移植中具有重要的作用，骨骼肌再生主要是由SC来完成的。肌肉损伤后损伤部位SC开始增殖、分化、形成新的肌纤维。BiSChoff在研究中指出，损伤或邻近损伤部位SC增殖明显，未损伤部位SC少量出现。骨骼肌SC激活、分化和再生过程与胚胎期肌肉的发育过程相似，MyoD是SC激活和增殖的标志。曾缨等探讨了成肌调节因子MyoD在骨骼肌损伤修复过程中的动态表达，结果MyoD在肌肉损伤后的再生修复过程中起着重要作用，可作为鉴定肌肉前体细胞和反映肌肉再生的指标。大量研究表明，MyoD参与骨骼肌损伤修复过程。但药物对不同负荷离心运动造成的大鼠骨骼肌微损伤过程中MyoD表达、卫星细胞在再生和修复过程中的动态变化及其与骨骼肌损伤和修复关系的研究还未见文献报道。 　　本研究通过对雄性wister大鼠8周不同强度运动干预的实验，观察运动导致的肌肉损伤后不同时程骨骼肌的SC、MyoD的变化，在修复过程中进行药物干预，为科学、准确地判断运动性骨骼肌损伤的研究和损伤修复机制的探索提供新的实验依据。 　　1实验对象与方法 　　1.1实验对象 　　104只雄性wister大鼠随机分为安静对照组（S）、无负荷组（N）、中等负荷组（M）和大负荷组（H），然后将不同负荷组随机分成治疗（T）组和非治疗（n）组。 　　1.2实验材料 　　6～8周雄性Wister大鼠104只，体质量（250±50）g，购自吉林大学动物实验中心。Wister大鼠实验前均未进行过跑台运动。动物饲养室符合国家二级动物饲养标准，每笼5只，自由饮食，分笼饲养，饲养笼为塑料制品，并配有不锈钢罩，玻璃吸水瓶以及不绣钢吸水管，饲养笼垫料为消毒碎木屑，每1～2天更换1次。动物饲养环境温度为（23.0±2.0）℃，相对湿度约为40%～60%，光照时间约为12h，云南白药气雾剂[国药准字规格：（50g+60g），倒置显微镜（OlymPus），图像处理仪（IBAS2000）]。 　　1.3动物分组及动物模型制备 　　本实验研究参照于新凯和Armstrong等专家的一次性跑台（下坡跑）行为学试验方法，构建骨骼肌损伤模型。在实验前2d，研究对象进行5～10min跑台运动，以便于熟悉动物跑台，速度5～10m?min-1，坡度为0。104只雄性wister大鼠随机分为大负荷组P（n=32）、中等负荷M（n=32）、无负荷组N（n=32）、安静对照组S（n=8）。然后将不同负荷组随机