乳腺浸润性导管癌微淋巴管密度检测及其临床病理意义.docVIP

乳腺浸润性导管癌微淋巴管密度的检测及其临床病理意义 　　【中图分类号】R736【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783(2010)07-0198-01 　　【摘要】 对本院2007年1月～2009年10月存档的68例乳腺IDC组织采用鼠抗人D2-40单克隆标记,免疫组化S-P二步法在光镜下观察LMVD。结果:68例乳腺IDC患者LMVD明显高于乳腺纤维瘤组织LMVD,两者差异具有统计学意义(P0.01);随着腋窝淋巴结转移数目的增多,LMVD也不断增大,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:乳腺IDC中存在微淋巴管的生成,在与其发展关系密切,并在肿瘤的转移中起到重要作用 　　【关键词】乳腺IDC;微淋巴管;LMVD 　　 　　乳腺浸润性导管癌(invasive ductual carcinoma, IDC)是乳腺癌分类中最大的一组异型肿瘤,占乳腺癌发病率的80%左右。传统的治疗方法对乳腺癌的的治疗具有一定的局限性,其主要原因是肿瘤的复发和转移。研究发现微淋巴管在乳腺IDC的转移中起到重要作用。本文通过免疫组化法单克隆抗体D2-40标记检测的微淋巴管密度(lymphatic microvessel density, LMVD),以此探讨LMVD在乳腺IDC的临床病理学意义。 　　1 材料与方法 　　1.1 一般资料 　　收集我院病理科保存的2007年1月～2009年10月存档的68例女性乳腺癌手术切除组织石蜡标本及相关临床病理资料,按照WHO乳腺肿瘤组织病理学分类(2003)标准确诊均为乳腺IDC。患者年龄为31～76岁,平均年龄53±5.7岁。术前均经B超、CT、肿瘤标记物等检查排除第二种肿瘤,术前均未行任何放疗、化疗和生物治疗。按照美国癌症研究联合会(AJCC)第六版《癌症分期手册》进行TNM分期:I期22例,Ⅱ期19例,Ⅲ期27例;根据WHO“绝经”定义判断绝经25例,未绝经43例。另取12例乳腺纤维腺瘤(良性病变)组织作对照。 　　1.2 主要试剂 　　鼠抗人D2-40单克隆即用型抗体;即用型免疫组化学S-P超敏试剂盒Ultrasensitive?;DAB显色剂;所有试剂均购自武汉博士德生物试剂公司。 　　1.3 免疫组化方法 　　采用SP二步法免疫组化染色法。石蜡标本定向切片,厚度为4 μm,将其置于处理好的载玻片;烘干的切片依次用二甲苯、无水乙醇和95%乙醇脱蜡;0.1%胰蛋白酶消化;用微波抗原修复液处理;滴加D2-40、VEGFR-3工作液;置于湿盒中,常温孵育;滴加二抗;PBS冲洗;DAB显色;衬染;封片;观察,记录结果。每批染色均设立阳性对照和阴性对照,以试剂公司提供的卵巢癌阳性标本作阳性对照,以PBS代替一抗作为阴性对照。 　　1.4 结果判定 　　D2-40单标免疫组化染色以胞浆和(或)胞膜呈清晰棕黄色颗粒为阳性表达,包括被染成棕黄色的微管、单个内皮细胞或细胞。微淋巴管密度(LMVD)判定方法参照Weidner的报道[1]:根据D2-40染色以阳性着色的单个内皮细胞或内皮细胞簇分别计为一个阳性微淋巴管,不一定要有完整的管状结构,在低倍镜下先选取乳腺IDC边缘区、中心区以及相应正常乳腺IDC组织阳性染色微淋巴管最丰富的区域即“热点”,然后在高倍镜下(×200)观察每个热点中的5个视野,计数其中脉管数,但应忽略管腔直径8个红细胞或管壁有平滑肌存在的脉管,最后计算2个热点、5个视野的平均淋巴管数目 　　1.5 统计学分析 　　所有实验数据使用SPSS 13.0进行软件统计分析。所有临床资料以±s表示,年龄、分期等资料采用t检验,LMVD等计数资料采用x2检验。 　　2 结果 　　2.1 LMVD的形态和分布 　　 D2-40阳性染色微淋巴管位于淋巴管内皮细胞胞膜和胞浆,呈棕黄色颗粒状。微淋巴管“热点”大多数位于肿瘤周围基质中,而肿瘤组织内部分布较少。与乳腺纤维瘤组织内LMVD比较,IDC癌周微淋巴管增多,脉管管壁较薄,形态不规则,呈扩张状,少部分呈闭塞状态,无红细胞和中性粒细胞填充。68例乳腺IDC患者LMVD明显高于乳腺纤维瘤患者LMVD,两者差异具有统计学意义(P0.01),详情见表1。 　　表1 D2-40标记乳腺IDC组织与乳腺癌纤维瘤组织LMVD比较 　　组别 n LMVD P 　　D2-40标记乳腺IDC组织 68 14.21±2.14 0.01 　　乳腺癌纤维瘤组织 12 3.35±1.24 　　 　　2.2 肿瘤周围基质和中心LMVD比较 　　新生微淋巴管大多数位于乳腺IDC肿瘤周围基质,LMVD为16.53±3.05,肿瘤中心区数量相对较少,LMVD为8.89±1.23,肿瘤周围基质与肿瘤中心区LMVD均值间差异有统计学意(P0.0