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中药诃子的抑菌作用及超微构 　　摘要：采用牛津杯法对14种中草药进行抑菌活性筛选，利用液体稀释法考察中药诃子（Fructus chebulae）对大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度，观察中药诃子作用下3种菌株的超微结构变化。结果表明：诃子、黄芩、大蒜、苍术、青蒿、石榴皮、百部、茵陈、干姜等9种中草药对3种细菌都有抑制作用；连翘、夏枯草、白头翁、大黄、附子等5种中草药对3细菌则未见抑制作用。透射电镜下观察表明，经中药诃子作用4.5 h后，大肠杆菌细胞质与细胞壁出现明显分离，细胞质固缩，细胞中间出现腔隙。 　　关键词：诃子；抑菌作用；超微结构；最低抑菌浓度 　　中图分类号： R285文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）06-0281-03 　　收稿日期：2013-09-24 　　基金项目：吉林省财政专项。 　　作者简介：刘伟（1980―），吉林大安人，讲师，从事植物病理学研究。E-mail：lwtong@163.com。 　　通信作者：唐金花，讲师，从事植物病理学研究。E-mail：hit1102tjh@。随着抗生素的广泛使用，细菌耐药性问题日益突出，开发新的抗菌药物成为新的研究热点[1]。由于中药具有特殊的抗菌机理及活性成分，细菌不易产生耐药性，因此，关于中药抗菌活性研究也越来越引起人们的关注。苦参、蒲公英、黄芩等多种中药都具有抗菌作用[2-4]。中药诃子（Fructus chebulae）别称诃梨或随风子，为双子叶植物纲使君子科植物诃子的干燥果实，具有抗氧化、抗癌、降血糖、抗病毒、涩肠、敛肺、降火利咽等功效[5]。本研究通过牛津杯法、液体稀释法，研究诃子的抑菌作用及超微结构，旨在为开发利用诃子资源提供依据。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　1.1.1植物材料诃子、黄芩、大蒜、苍术、青蒿、石榴皮、百部、茵陈、干姜、连翘、夏枯草、白头翁、大黄、附子等14种中草药饮片均购于吉林省通化市老百姓大药房。 　　1.1.2试验菌株大肠杆菌（Escherichia coli）、绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginos）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）由中国医学菌种保藏中心提供。 　　1.1.3培养基LB培养基配方：酵母浸膏5 g，蛋白胨10 g，氯化钠10 g，水1 000 mL，pH值7.2。 　　1.2方法 　　1.2.1中药水提物将14种中草药饮片共500 g粉碎，过200目筛，用5倍量蒸馏水冷浸3次，每次24 h，合并提取液并减压浓缩成浸膏状，经细菌过滤器除菌，置于4 ℃冰箱中备用。 　　1.2.2菌悬液制备将各菌株接种于LB液体培养基中，37 ℃ 130 r/min摇床扩大培养至对数生长期，利用血球计数板法将各菌株用培养基配制成浓度为100万CFU/mL的菌悬液。 　　1.2.314种中草药抑菌活性筛选将各种中草药水提物稀释成5 g/mL备用。取浓度为100万CFU/mL的各菌液1 mL分别加入25 mL LB琼脂培养基，混匀倒入平皿中，然后将灭菌的牛津杯置于培养基上。再将各种中草药溶液加入牛津小杯中，每个牛津小杯中加入200 μL，阴性对照为LB液体培养基。将平皿置于37 ℃恒温箱中培养，24 h后取出。测量抑菌圈半径，重复3次，计算平均值，考察不同中草药的抑菌活性[6]。 　　1.2.4中药诃子对3种菌株的敏感性试验将中药诃子分别稀释成5、2.5、1.25、0.625、0.312 5 g/mL浓度后加入浓度为100万CFU/mL的各菌液牛津小杯中，以LB液体培养基为阴性对照，37 ℃恒温箱中培养24 h后观察，测量抑菌圈半径，重复3次，计算平均值，确定最低抑菌浓度（MIC）[7]。最低抑菌浓度（MIC）是指药物完全抑制某种微生物生长的最低浓度。 　　1.2.5扫描电镜观察将100万CFU/mL大肠杆菌悬液加入0.625 g/mL诃子药液中，37 ℃下150 r/min振荡培养 4.5 h 后离心弃上清，用磷酸缓冲液洗涤沉淀3次，用戊二醛将沉淀固定2 h，按照扫描电镜生物样品制备方法[8]将沉淀制成标本，于KYKY-1000B扫描电镜下观察。正常未加药液的大肠杆菌同上制备作为对照。 　　1.2.6透射电镜观察将0.625 g/mL诃子药液作用的大肠杆菌培养4.5 h后离心取样，用磷酸缓冲液洗涤沉淀3次，将沉淀用戊二醛固定2 h，按照透射电镜样品制备方法制备样品[9]，在JEM-2000EX透射电镜下观察。正常未加药液的大肠杆菌同上制备作为对照。 　　2结果与分析 　　2.114种中草药的抑菌效果 　　诃子、黄芩、大蒜、苍术、青蒿、石榴皮、百部、茵陈、干姜等9种中草药对3种细菌都有抑制作用。连翘、夏枯草、白