第1讲基因工程考纲要求全国卷五年考情1基因工程的诞生Ⅰ无.DOC

PAGE PAGE 1 第1讲　基因工程 考纲要求 全国卷五年考情 1.基因工程的诞生(Ⅰ) 无考题 2.基因工程的原理及技术(含PCR技术)(Ⅱ) 2017·卷ⅠT38，2017·卷ⅡT38，2017·卷ⅢT38，2016·卷ⅠT40，2016·卷ⅢT40，2015·卷ⅠT40 3.基因工程的应用(Ⅱ) 2014·卷ⅡT40，2013·卷ⅠT40 4.蛋白质工程(Ⅰ) 2015·卷ⅠT40，2015·卷ⅡT40，2013·卷ⅠT40 考点一| 基因工程的基本工具 (对应学生用书第241页) [识记—基础梳理] 1．基因工程的概念及优点 (1)概念：是指在体外通过人工“剪切”和“拼接”等方法，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞，并使重组基因在受体细胞中表达，产生人类需要的基因产物的技术。 (2)遗传原理：基因重组。 (3)优点： ①与杂交育种相比：克服了远缘杂交不亲和的障碍。 ②与诱变育种相比：能定向改造生物的遗传性状。 2．基因工程的基本工具 (1)限制性核酸内切酶 ①来源：主要从原核生物中分离纯化而来。 ②作用：识别特定的核苷酸序列并切开相应两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 ③结果：产生黏性末端或平末端。 (2)DNA连接酶 常用类型 E-coli DNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 大肠杆菌 T4噬菌体 功能 连接黏性末端 连接黏性末端和平末端 结果 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 (3)载体 eq \a\vs4\al(①常用载体,——质粒)eq \b\lc\{(\a\vs4\al\co1(化学本质：双链环状DNA分子,特点\b\lc\{(\a\vs4\al\co1(能自我复制,有一个至多个限制酶切割位点,有特殊的标记基因)))) ②其他载体：λ噬菌体衍生物、动植物病毒等。 [理解—深化探究] 1．限制酶 (1)识别序列的特点：呈现碱基互补对称，无论是奇数个碱基还是偶数个碱基，都可以找到一条中心轴线，如，以中心线为轴，两侧碱基互补对称；eq \o(=====,\s\up8(CCAGG),\s\do10(GGTCC))以eq \o(=====,\s\up8(A),\s\do10(T))为轴，两侧碱基互补对称。 (2)切割后末端的种类 2．限制酶和DNA连接酶的关系 (1)限制酶和DNA连接酶的作用部位都是磷酸二酯键。 (2)限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。 (3)DNA连接酶起作用时，不需要模板。 3．载体 (1)条件与目的 条件 目的 稳定并能复制 目的基因稳定存在且数量可扩大 有一个至多个限制酶切割位点 可携带多个或多种外源基因 具有特殊的标记基因 便于重组DNA的鉴定和选择 (2)作用 ①作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内。 ②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 [运用—考向对练] 1．下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题： 限制酶 BamHⅠ BclⅠ Sau3AⅠ HindⅢ 识别序列及切割位点 ↓ GGATCC CCTAGG ↑ ↓TGATCA ACTAGT ↑ ↓ GATC CTAG ↑ ↓ AAGCTT TTCGAA ↑ 图1　　　　　　　　　图2 (1)用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用________两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过________酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处于________态的大肠杆菌。 (2)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加________，平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中________。 (3)若BamHⅠ酶切的DNA末端与BclⅠ酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为________，对于该部位，这两种酶________(填“都能”、“都不能”或“只有一种能”)切开。 (4)若用Sau3AⅠ切图1质粒最多可能获得________种大小不同的DNA片段。 [解析]　(1)选择的限制酶应在目的基因两端且在质粒中存在识别位点，故可以用来切割的限制酶为BclⅠ、HindⅢ、BamHⅠ和Sau3AⅠ，但由于BamHⅠ和Sau3AⅠ可能使质粒中的启动子丢失或破坏抗性基因，所以应选用BclⅠ、HindⅢ两种限制酶切割。酶切后的载体和目的基因片段，通过DNA连接酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入感受态的大肠杆菌中，使其增殖。(2)根据质粒上抗性基因，为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加四环素。平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，目的基因DNA受热变性后解链为单链，引