人胰岛素基因人工合成及转化银耳研究.docVIP

人胰岛素基因的人工合成及转化银耳的研究 　　用PCR法合成人胰岛素基因，克隆到pUC18载体上，经测序证实其碱基序列与人胰岛素基因的序列完全一致。本实验还构建了银耳表达载体，由限制性内切酶介导（Restriction enzyme-mediated DNA Integration, REMI）转化银耳芽孢。随机挑取21个抗性菌落，转管繁殖2代后检测其GUS活性，实验结果：18个菌株阳性，3个菌株阴性。从这21个菌株中选取10个菌株，提取染色体DNA，用人胰岛素基因、GUS基因和Tnos序列的特异引物进行PCR，结果表明，这10菌株都能扩增出相应长度的特异片段，证明了它们是人胰岛素基因转化子。 　　人胰岛素；?A基因合成；?A基因转化；?A银耳；?A芽孢 　　S567.34; TQ460.72A 　　 　　糖尿病是人类的主要慢性疾病之一，胰岛素是针对糖尿病的特效药，开展人胰岛素基因工程研究具有重要的经济意义。银耳是著名的食药用菌，其子实体和芽孢均可食用，具有二型性（芽孢与菌丝）生活史，芽孢的生长特性与酵母菌相似，可作为外源基因转化研究材料。我们设想将银耳作为生物反应器，进行人胰岛素生产。为此开展了人胰岛素基因的人工合成，构建了表达载体，并进行了转化银耳的研究，获得初步结果，现报道如下。 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1.1主要材料 　　银耳(Tremell