伪狂犬病毒TK基因缺失通用转移载体构建及初步应用.docVIP

伪狂犬病毒TK基因缺失通用转移载体的构建及初步应用 　　摘要以伪狂犬病毒为载体表达其他病原体抗原蛋白是伪狂犬病疫苗研究的一个重要方向。根据已发表的伪狂犬病毒(PRV)Ra株TK基因序列设计2对引物,用PCR方法得到同源左右臂,克隆入PUC19载体中。利用平末端连接的方法将绿色荧光蛋白(EGFP)的基因表达盒插入到缺失位点,并在下游引入1个多克隆位点,构建缺失通用转移载体PUC19TK-EGFP。用脂质体转染试剂盒将PUC19TK-EGFP和PRV-Ra株的基因组共转染BHK细胞,以EGFP为标记基因,用噬斑法得到纯化的重组病毒,命名为TK/EGFP,为研制以伪狂犬病毒为载体的二价或多价基因工程疫苗奠定了物质基础。 　　关键词伪狂犬病毒; TK基因;通用转移载体 　　中图分类号 S858.292 文献标识码A文章编号 1007-5739(2009)15-0308-03 　　 　　ConstructionandPrimaryApplicationofUniversalTransferVectorDeletingTK ofPseudorabiesVirus 　　HAN Jing-fangCHEN Rui-ai*SHAO Ding-yongTANG Man-huaLIANG Gui-yi 　　(Guangdong Dahuanong Animal Health Products Co., Ltd., XinxingGuangdong 527400) 　　AbstractUse of PRV as a system for expression of foreign antigens has been increasingly evaluated as an alternative to conventional vaccine production system. In this study,according to the Genbank open sequence,two pairs of primer were designed in order to obtain homology recombination arms of TK gene of PRV-Ra strain. Then both of them were inserted into PUC19 vector. A report gene expression cassette,EGFP containing a multicloning sites,was inserted into PUC19HEK/TK to construct a universal transfer vector PUC19TK-EGFP. It was used to co-transfect BHK cell together with the genome of PRV Ra strain,a recombinat virus was selected and purified 3 times in BHK cell through EGFP gene and named TK/EGFP. The above results demonstrated that the universal transfer vector might be contributive to developed bivalence or multivalence genetically engineering vaccine in the future. 　　Key wordsPseudorabies virus ;TK gene;universal transfer vector 　　 　　伪狂犬病(Pesudorabies, PR)是由伪狂犬病病毒(Pesudo-rabies virus,PRV)引起的多种家畜和野生动物的一种急性传染病,是严重危害全球养猪业的传染病之一[1]。 PRV属于疱疹病毒科(Herpesviridac)、α-疱疹病毒亚科(Alphaher-pesririnae)水痘病毒属(Varicello virus)的疱疹病毒Ⅰ型(Porcine herpesvirus TypeⅠ),其基因组为双链DNA,全长约150kb,编码72～100种蛋白质,存在许多与病毒复制无关的非必需基因,在这些非必需基因中能够插入其他病原的免疫原性基因或报告基因而不影响病毒的增殖。PRV的这种特性为其作为病毒活载体用于构建二价或多价基因工程疫苗提供了分子操作基础[2]。病毒的胸苷激酶基因是PRV的主要毒力基因,也是病毒的非必需基因,将该基因缺失不影响病毒在细胞中的增殖,但其毒力大大