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脂肪干细胞基础与临床 脂肪来源干细胞 脂肪来源干细胞 脂肪来源干细胞的命名 脂肪来源干细胞 (Adipose Derived Stem Cell, ADSC) 脂肪来源间充质干细胞 (Adipose Derived Msenchymal Stem Cell, AD-MSC(ASC)) 脂肪来源血管基质成分 (Stromal Vascular Fraction,SVF) 富含大量的CD34+细胞,从脂肪组织直接获得 富含一定量的CD34+细胞,SVF培养P0-P2 不富含CD34+细胞,SVF培养P2之后 脂肪干细胞的鉴定 在缺少分化刺激因子的条件下，ASC表面标志蛋白有HLA-ABC、CD9、CD10、CD13、CD29、CD34、CD44、CD49、CD54、CD55、CD59、CD105、CD146、CD166； 经过14d的诱导培养后, ASC虽然发生了形态变化，表现出成脂细胞、成软骨细胞、成骨细胞等分化的特征，但表面蛋白的表达却大致与未分化前一致，这些表面蛋白与BMSC的表面蛋白很相似。 ASC和BMSC均表达CD13、CD29、CD44、CD105，均不表达CD31、CD34、CD45、HLA-DR。虽然从分子标识上看ASC和BMSC具有相同的表面粘附分子和受体分子，但两者仍有区别。ASC表达CD49d，而不表达CD106，BMSC则相反，造成这种区别的机制可能与细胞所处的微环境及具体功能有关。 间充质干细胞没有特异的表面标志已得到公认。免疫组化染色和流式细胞仪检测等免疫表型的结果对确认脂肪干细胞有辅助作用，但鉴定脂肪干细胞的最好方法是进行多系定向诱导，并进行相应检测以确定诱导成功。???  脂肪干细胞的表面标记 a)粘附分子：ADAS细胞始终表达tetraspan蛋白(CD9)、整合素β1(CD29)和α4(CD49 d)；细胞间粘附分子1(ICAM1，CD54)、endoglin(cd102)、血管细胞粘附分子(VCAM，CD106)及活化的淋巴细胞粘附分子(ALCAM，CD166)。但不表达神经细胞粘附分子(NCAM，CD56)、细胞间粘附分子3(ICAM-3，CD50)、整合素αb(CD11b)和β2(CD18)及内皮选择蛋白(Eselectin，CD62)； b)分子受体：可表达透明质酸盐(CD44)和转铁蛋白(CD71)的受体； c)细胞外基质蛋白和糖蛋白：ADAS细胞能生成Ⅰ和型胶原、骨桥蛋白、ostenectin、Thy-1(CD90)和MUC-18(CD146)； d)肌蛋白：能表达平滑肌细胞内的肌动蛋白和波形蛋白；e)造血细胞标记：不表达造血细胞标志物CD14、CD31或CD45； f)补体调节蛋白：确定能表达衰变加速因子(CD55)和补体蛋白； g)组织相容性抗原：表达类组织相容性蛋白HLA-ABC，而不表达类蛋白HLA-DR。 不同的试验结果结果有不同，但这种差异可能是在细胞分离、培养、纯正化方法不同，以及免疫组化技术和流式细胞仪敏感性的不同而造成。总的来说，PAL细胞的免疫表型与已经报道的骨髓间充质干细胞是相似的。 脂肪干细胞的体外培养 脂肪干细胞在脂肪组织中含量很低，要利用脂肪干细胞就必须进行体外分离培养扩增。常用的方法是将剪碎的脂肪组织消化离心，倾去上层脂肪及上清，获得基质血管层，将其收集到培养瓶中培养，除去未贴壁的红细胞和残渣，剩余的细胞群体称为加工过的脂肪吸取物。原代培养的细胞中贴壁的细胞较少，细胞生长至融合后传代，传代后的细胞称为脂肪干细胞。平均每300mL脂肪组织可获得2×108～6×108 个这样的细胞。??? 体外培养条件下，ASC的培养不像BMSC对培养基中胎牛血清的来源和质量有严格要求，DMEM、αMEM、RPMI1640是ASC的常用培养基。一般只添加体积分数为10％的胎牛血清，并且血清无生产批号限制。在传代培养中，平均倍增时间为60h。并表现低水平衰老，1代时细胞没有出现衰老现象，10代时少于5％细胞出现衰老，15代时衰老细胞比例仍低于15％，这表明脂肪ASC体外扩增能力很强，传代培养易于获得大量有分化能力的细胞。 脂肪干细胞成脂分化 ASC在特定促进因素下可分化为脂肪细胞，长期培养仍可维持此种分化能力。 脂肪细胞分化过程大致如下： （1）脂肪干细胞向脂肪细胞定向分化，形成脂肪母细胞（一种尚未出现脂滴的梭形细胞）；（2）脂肪母细胞经过生长抑制、克隆性增殖，形成前体脂肪细胞（此时细胞刚开始出现脂滴）；（3）前体脂肪细胞经过生长抑制、克隆性增殖和一系列基因表达的变化，形成不成熟脂肪细胞或多室脂肪细胞（内含大量小脂滴）；（4）多室脂肪细胞随着脂肪在细胞中的沉积，小脂滴逐渐汇集成