1 基因工程的基本概念 2 基因工程的诞生 3 基因工程的探究内容 4 基因.pptVIP

* 基 因 工 程 生物工程专业核心课程 授课教师:李京京 Genetic Engineering 1.基因工程概述 2.基因工程的基础知识与基本技术 3.基因工程所需基本条件 4.基因工程的操作过程 5.目的基因的获取 6.克隆基因的表达 7.转基因生物技术 一、基因工程概述 1 基因工程的基本概念 2 基因工程的诞生 3 基因工程的研究内容 4 基因工程的应用 5 基因工程的安全性 A 重组DNA技术的基本定义 重组DNA技术是指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序，也称为分子克隆技术。 因此，供体、受体、载体是重组DNA技术的三大基本元件。 1 基因工程的基本概念 B 基因工程的基本定义 基因工程是指重组DNA技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建（即重组DNA技术）；而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。 2 基因工程的诞生 A 基因工程诞生的理论基础 1 ) DNA是遗传物质 肺炎双球菌转化实验, 1944年 Avery，确定了基因的分子载体是DNA，而不是蛋白质。 噬菌体转染实验, 1952年Alfred Hershy和Marsha Chase进一步证明遗传物质是DNA。 2) DNA双螺旋结构 1953年James D. Watson和Francis H. C. Crick揭示了DNA分子的双螺旋结构和半保留复制机制。 3 ) 中心法则和遗传密码 1957年Crick又提出了遗传信息传递的“中心法则” DNA RNA protein 1964年Marshall Nirenberg和Gobind Khorana等终于破译了64个遗传密码 B 基因工程诞生的技术突破 1 ) 限制性内切酶（restriction enzymes） 1970年H.O. Smith等分离出第一种限制性核酸内切酶。 Werner Arber 理论预见限制酶 Hamilton O. Smith 得到第一个限制酶 Daniel Nathans 用限制酶切得SV40 DNA片断 2 ) DNA连接酶（ligase） 1967年5个实验室几乎同时发现了DNA连接酶。 3 ) 载体（vector） 1972年前后使用小分子量的细菌质粒和?噬菌体作载体。在细菌细胞里的大量扩增。 4 ) 感受态体系 1970年M. Mandel和A. Higa发现经过氯化钙处理的大肠杆菌容易吸收噬菌体DNA。1972年S. Cohen发现这种处理过的细菌同样能吸收质粒DNA。 5 ）逆转录酶 1970年Baltimore等人和Temin等人同时各自发现了逆转录酶。 6 ）琼脂糖凝胶电泳 1960s发明了琼脂糖凝胶电泳，可将不同长度的DNA分离开。 7 ）DNA测序技术 1975年F. Sanger、A. Maxam和W. Gilbert发明了DNA快速测序技术。 C 基因工程的诞生 1 ）Berg的开创性实验 1972年斯坦福大学的Paul Berg小组完成了首次体外重组实验： 将SV40的DNA片断与?噬菌体的DNA片断连接起来。 2 ）Boyer-Cohen实验 1973年斯坦福大学的S. Cohen小组将含有卡那霉素抗性基因的大肠杆菌R6-5质粒与含有四环素抗性基因的另一种大肠杆菌质粒pSC101连接成重组质粒，具有双重抗药性。 后来又把非洲爪蟾核糖体基因片断同pSC101质粒重组，转化大肠杆菌，并在菌体内成功转录出相应的mRNA。这是第一次成功的基因克隆实验。 Boyer-Cohen实验 3 基因工程的研究内容 1 ）目的基因的获取 从复杂的生物基因组中，经过酶切消化或PCR扩增等步骤，分离出带有目的基因的DNA片断。 2 ）重组体的制备 将目的基因的DNA片断插入到能自我复制并带有选择性标记（抗生素抗性）的载体分子上。 3 ）重组体的转化 将重组体（载体）转入适当的受体细胞中。 4 ）克隆鉴定 挑选转化成功的细胞克隆（含有目的基因）。 5 ）目的基因表达 使导入寄主细胞的目的基因表达出我们所需要的基因产物。 基因工程基本过程 大鼠生长激素基因转入小鼠 4 基因工程的应用 A 基因工程在医药上的应用 1 ） 基因制药 通过DNA重组技术将天然存在于人体内起着各种生理功能且含量甚少以至微量的活性多肽、蛋白质、糖肽所编码的基因片断导入微生物或哺乳动物细胞中进行扩增和表达,通过纯化、提取制备出高纯度、高活性的生物有效物质. 1976年，27岁的风险投资人Robert Swanson与 Un