312基因工程的基本操作程序(丽).pptVIP

* 　　1、基因工程的概念，操作水平，原理 2、基因拼接的理论基础 3、外源基因表达的理论基础 4、限制酶的作用特点，作用部位，作用结果 5、DNA连接酶和DNA聚合酶的异同点 6、载体需要具备的条件，常用载体的种类 复习回顾： 已知标记基因有抗四环素和抗氨苄青霉素,现探讨某质粒中有无标记基因或标记基因是什么?根据实验结果得出相应的结论。 对照组：不加抗 生素 实验组1：加四环素 实验组2：加氨苄 青霉素 实验组3： 加四环素和 氨苄青霉素 - - - + 实验组3 - - + 预期四 + - + 预期三 - + + 预期二 + + + 预期一 结 论 实验组2 实验组1 对照组 既含有抗四环素基因也含有抗氨苄青霉素基因 只含有抗四环素基因 只含有抗氨苄青霉素基因 既不含有抗四环素基因也 不含有抗氨苄青霉素基因 “+”“-”分别表示有无细菌生长 原核细胞的基因结构 真核细胞的基因结构 （启动子） （终止子） （终止子） （启动子） 基因工程的基本操作程序 一、目的基因的获取 二、基因表达载体的构建 三、将目的基因导入受体细胞 四、目的基因的检测与鉴定 目的基因主要是指______________________ 编码蛋白质的结构基因 目的基因的获取 供体生物细胞 取出DNA 用限制酶剪去多余部分 目的基因 即：将需要的基因从供体生物细胞内提取出来 　目前被广泛提取使用的目的基因有：苏云金芽孢杆菌抗虫基因、植物抗病基因（抗病毒、抗细菌)、人胰岛素基因等。 1、从基因文库中获取目的基因 1）什么是基因文库？ 2）怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因？ 种类： 基因组文库： 部分基因文库(cDNA文库)： 获得目的基因的方法 2）利用PCR技术扩增目的基因 3）人工合成 含有一种生物的 基因 含有一种生物的 基因 根据基因的有关信息：如基因的表达产物蛋白质 全部 部分 1、从基因文库中获取目的基因 1）什么是基因文库？ 2）怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因？ 种类： 基因组文库： 部分基因文库(cDNA文库)： 获得目的基因的方法 2）利用PCR技术扩增目的基因 3）人工合成 含有一种生物的 基因 含有一种生物的 基因 根据基因的有关信息：如基因的表达产物蛋白质 全部 部分 1.用一定的_________切割 质粒，使其出现一个切 口，露出____________。 2.用_____________切断目 的基因，使其产生_____ ____________。 —— 核心 3.将切下的目的基因片段插入质粒的______处， 再加入适量___________，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒） 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 的黏性末端 切口 DNA连接酶 相同 (二)基因表达载体的构建 科学家在培育抗虫棉时，经过了许多复杂的过程和不懈的努力，才获得成功。 起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。 然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子(抗虫基因首端)，导入棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入终止子(抗虫基因末端)，导入棉花受精卵，结果成长的植株，有了抗虫能力。 资 料: 基因表达载体的组成： 目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 e、复制原点 (三)将目的基因导入受体细胞 常用的受体细胞： 动植物细胞、大肠杆菌、土壤农杆菌、枯草杆菌等。 将目的基因导入受体细胞的原理： 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 转化—— 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 方法 导入植物细胞 导入动物细胞 导入微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 —— 感受态细胞吸收DNA分子 (三)将目的基因导入受体细胞 (四)目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功 检测 ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 方法—— 方法—— 方法—— DNA-DNA分子杂交 (四)目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功 检测 ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是