基因工程(基因工程的基本条件-载体系统).pptVIP

第二节 基因工程的载体系统 (二)质粒载体(Plasmid) 2. 核糖体结合位点对外源基因表达的影响 SD序列的影响： 一般来说，mRNA与核糖体的结合程度越强，翻译的起始效率就 越高，而这种结合程度主要取决于SD序列与16S rRNA的碱基互补 性，其中以GGAG四个碱基序列尤为重要。对多数基因而言，上述 四个碱基中任何一个换成C或T，均会导致翻译效率大幅度降低 。 Shine-Dalgarno（SD）序列：位于翻译起始密码子上游的6-8个 核苷酸序列5’ UAAGGAGG 3’，它通过识别大肠杆菌核糖体小亚 基中的16S rRNA 3’端区域3’ AUUCCUCC 5’并与之专一性结合， 将mRNA定位于核糖体上，从而启动翻译； SD序列与起始密码子之间的序列的影响： 紧邻AUG的前三个碱基成份对翻译起始也有影响，对于大肠杆菌b-半乳糖苷酶的mRNA而言，在这个位置上最佳的碱基组合是UAU或CUU，如果用UUC、UCA或AGG取代之，则酶的表达水平低20倍。 SD序列下游的碱基若为AAAA或UUUU，翻译效率最高；而CCCC或GGGG的翻译效率则分别是最高值的50%和25%。 SD序列与起始密码子之间的距离的影响： SD序列与起始密码子之间的精确距离保证了mRNA在 核糖体上定位后，翻译起始密码子AUG正好处于核糖体 复合物结构中的P位，这是翻译启动的前提条件。 在很多情况